常见化学发光免疫分析关键技术比较.docVIP

常用化学发光免疫分析技术比较

1、化学发光免疫分析

化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay，CLIA)，

英音：[,kemi,lju:mines?ns][,imju:n?u?sei]

是将具备高敏捷度化学发光测定技术与高特异性免疫反映相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间辨别荧光免疫分析之后发展起来一项最新免疫测定技术。

CLIA是将具备高敏捷度化学发光测定技术与高特异性免疫反映相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间辨别荧光免疫分析之后发展起来一项最新免疫测定技术。

1.1、化学发光免疫分析原理

化学发光免疫分析包括两个某些，即免疫反映系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是运用化学发光物质经催化剂催化和氧化剂氧化，形成一种激发态中间体，当这种激发态中间体回到稳定基态时，同步发射出光子(hv)，运用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反映系统是将发光物质(在反映剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上，或酶作用于发光底物。

1.2、化学发光免疫分析类型

化学发光免疫分析法以标记办法不同而分为两种:

(1)化学发光标记免疫分析法;

(2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂化学发光酶免疫分析法

1.2.1

化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CLIA)，是用化学发光剂直接标记抗原或抗体免疫分析办法。惯用于标记化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester(AE)，是有效发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2)作用而发光，强烈直接发光在一秒钟内完毕，为迅速闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析，其化学反映简朴、迅速、不必催化剂；检测小分子抗原采用竞争法，大分子抗原则采用夹心法，非特异性结合少，本底低；与大分子结合不会减小所产生光量，从而增长敏捷度。

1.2

从标记免疫分析角度，化学发光酶免疫分析(chemiluminescentenzymeimmunoassay，CLEIA)，应属酶免疫分析，只是酶反映底物是发光剂，操作环节与酶免分析完全相似：以酶标记生物活性物质(如酶标记抗原或抗体)进行免疫反映，免疫反映复合物上酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。当前惯用标记酶为辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)，它们有各自发光底物。

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惯用底物为鲁米诺(3-氨基邻苯二甲酰肼,luminol)，或其衍生物如异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼)，是一类重要发光试剂。其构造如图4所示。鲁米诺氧化反映在碱性缓冲液中进行，在过氧化物酶及活性氧[过氧化阴离子(O2-)，单线态氧(1O2)，羟自由基(OH·)，过氧化氢(H2O2)]存在下,生成激发态中间体，当其回到基态时发光，其波长为425nm。

初期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体)，但标记后发光强度减少而使敏捷度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体，进行免疫反映后运用鲁米诺作为发光底物，在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH-H2O2)作用下，鲁米诺发光，发光强度依赖于酶免疫反映物中酶浓度。KodakAmerliteTM半自动分析系统就是运用这一体系专门设计。

1.2.2.2增强发光酶免疫分析(enhancedluminescenceenzymeimm

在发光系统中加入增强发光剂，如对2碘苯酚等，以增强发光信号，并在较长时间内保持稳定，便于重复测量，从而提高分析敏捷度和精确性。在全自动分析仪上，还可通过计算机严密控制，进行自动操作，如加试剂，混合，温育，洗涤，加发光试剂，发光计数，数据解决，绘制原则曲线，直至完毕病人血清样品分析并打印出成果。AmerliteTM发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂，其发光时间可持续长达20min，试剂盒有甲状腺功能检测促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素，与性激素关于有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮，以及其她方面如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。

1.2.2.3ALP标记CLEIA

所用发光底物为环1，2-二氧乙烷衍生物,,用于化学发光酶免分析底物而设计分子构造中包括起稳定作用金刚烷基，其分子中发光基团为芳香基团和酶作用基团，在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光。最常使用底物AMPPD3-[2-spiroadamatane]-4-methoxy-4-[3-phosphoryloxy]-p