发热伴血小板减少综合征血清学、病原学诊断方法、病原学、临床及流行病学资料.docxVIP

（规范性）

发热伴血小板减少综合征血清特异性抗体检测

A.1IgM捕获ELISA法（MacELISA）检测SFTS病毒IgM抗体

A.1.1原理

根据抗原抗体特异性结合的原理，用酶标板中预包被的抗人IgM抗体（抗μ链）捕获待检测血清中的IgM抗体，加入酶标病毒抗原，或先后加入病毒抗原与酶标特异性抗体，反应后加底物显色。显色程度与特异性IgM抗体含量呈正相关。

A.1.2实验材料

可根据所用试剂盒的相关要求进行调整。

a)洗板机、酶标仪、恒温温箱或水浴箱（37℃±2℃）。

b)10μL～200μL可调移液器、10mL吸管。

c)稀释血清用的试管。

d)蒸馏水或去离子水。

e)吸水纸。

f)SFTS病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒。

A.1.3检测步骤

应参考所选用试剂盒说明书进行检测，主要步骤如下。

a)在包被板中加入样品稀释液，100?μL/孔，然后在相应孔中加入阴、阳性对照以及待检血清各10?μL。

b)封板膜封板后混匀，37℃孵育30?min。

c)用洗涤液冲洗6次，拍干。

d)每孔加入辣根过氧化物酶标记的病毒抗原，或先后加入病毒抗原与酶标特异性抗体100?μL，然后重复步骤b)和c)。

e)于各反应孔内加显色液，混匀后置37℃避光显色15?min。

f)加终止液（主要成分为1moL/L硫酸溶液）于每反应孔，50?μL/孔，轻拍混匀。

g)30?min内于450?nm波长处（建议用双波长450?nm/630?nm检测）读取每孔的吸光度。

A.1.4结果判断

在阴、阳性对照成立的情况下，待检血清OD值≥临界值者为阳性，小于临界值者为阴性。临界值计算公式：临界值?=?阴性对照平均OD值（阴性对照OD值若小于0.05，则按0.05计算）+0.10。

A.1.5意义

IgM抗体阳性，表示患者新近或曾经感染SFTS病毒，可用于临床诊断参考。

A.2胶体金等标记法快速检测SFTS病毒IgM/IgG抗体

A.2.1原理

在用硝酸纤维素膜制备的免疫层析试纸条上包被抗人IgM单克隆抗体、抗人IgG单克隆抗体，可捕获人血清中IgM和IgG抗体，采用SFTS病毒抗原作为标记抗原，若样本中含病毒特异性的IgM、IgG抗体，则检测区相应位置出现条带。

A.2.2试验材料

可根据所用试剂盒的相关要求进行调整。

a)胶体金标记试纸条快速IgM/IgG检测试剂盒；

b)滴管或加样器。

A.2.3检测步骤

应参考所选用试剂盒说明书进行检测，主要步骤如下。

a)撕开铝箔袋，取出试剂卡，平置于水平桌面上做好标记。

b)将血清标本用缓释液稀释（1:100）后,取适量（60?μL～80?μL）滴加于测试卡上的样品孔内，

c)5?min～20?min内观察结果。

A.2.4结果判断

在质控区出现紫色条带显示检测成立，检测区出现紫色条带表示SFTS病毒特异性IgM和/或IgG抗体阳性。

A.2.5意义

IgM抗体阳性，表示患者新近或曾经感染SFTS病毒，可用于临床诊断参考。

IgG抗体阳性,提示患者曾受到SFTS病毒感染；恢复期较急性期IgG抗体阳转，可确诊。

A.3间接酶联免疫吸附试验检测抗SFTS病毒IgG抗体

A.3.1原理

将SFTS病毒抗原包被酶标板，结合样本中病毒特异性抗体，再加酶标记的抗人IgG抗体进行检测，反应后加底物显色或发光。显色程度或发光强度与特异性IgG抗体含量呈正相关。

A.3.2试验材料

可根据所用试剂盒的相关要求进行调整。

a)洗板机、酶标仪、恒温温箱或水浴箱（37℃±2℃）。

b)10μL～200μL可调移液器、10mL吸管。

c)稀释血清用的试管。

d)蒸馏水或去离子水。

e)吸水纸。

f)SFTS病毒IgG抗体ELISA检测试剂盒。

A.3.3检测步骤

应参考所选用试剂盒说明书进行检测，主要步骤如下。

a)在包被板中加入样品稀释液，100μL/孔，然后在相应孔中加入阴、阳性对照以及不同稀释度的待检血清。

b)封板膜封板后混匀，37℃孵育40min。

c)用洗涤液冲洗6次，拍干。

d)每孔加入辣根过氧化物酶标记的酶结合物100μL，然后重复步骤b)和c)。

e)于各反应孔内加显色液，混匀后置37℃避光显色15min。

f)加终止液（主要成分为1moL/L硫酸溶液）于每反应孔，50μL/孔，轻拍混匀。

g)30min内于450nm波长处读取每孔的吸光度。

A.3.4结果判断

在阴、阳性对照成立的情况下，待检血清OD值≥临界值者为阳性，小于临界值者为阴性。临界值计算公式：临界值=阴性对照平均OD值（阴性对照OD值若小于