饲料中赭曲霉毒素A的测定 征求意见稿.pdf

GB/T19539－202×

饲料中赭曲霉毒素A的测定

1范围

本文件描述了饲料中赭曲霉毒素A（OchratoxinA，以下简称OTA）的测定方法。

本标文件适用于饲用谷物原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、宠物添加剂预混合饲料中赭曲

霉毒素A的测定。

本文件第一法的定量限为4ug/kg，第二法的定量限为1ug/kg。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20195动物饲料试样的制备

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4第一法酶联免疫吸附测定法（快速筛选法）

4.1原理

试样用甲醇-水提取，采用抗原-抗体免疫竞争性反应，OTA含量与试样最终颜色深浅成反比，外标

法定量。

4.2试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

注：不同的试剂盒制造商的产品组成和操作会有差别，在分析时应参考说明书。

4.2.1水：GB/T6682，一级。

4.2.2甲醇。

4.2.3氯化钠。

4.2.4氯化钾。

4.2.5磷酸二氢钾。

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4.2.6十二水磷酸氢二钠。

4.2.7吐温20。

4.2.8柠檬酸钠。

4.2.9四甲基联苯胺（TMB）。

4.2.10二丁基羟基甲苯（BHT）。

4.2.11过氧化氢。

4.2.12浓硫酸。

4.2.13柠檬酸。

4.2.14提取液（70%甲醇溶液）：取甲醇（4.2.2）70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。

4.2.15洗涤液：分别称取40.0g氯化钠（4.2.3）、1.0g氯化钾（4.2.4）、1.0g磷酸二氢钾（4.2.5）、

14.5g十二水磷酸氢二钠，加入2.5mL吐温20（4.2.7），用水溶解并定容至500mL，得到浓缩洗涤

液，使用前用水10倍稀释。

4.2.16柠檬酸缓冲溶液:分别称取10.15g柠檬酸钠（4.2.8）、13.76g柠檬酸（4.2.13），用水溶解并定

容至1000mL，混匀。

4.2.17底物溶液甲:称取0.4gTMB（4.2.9），用柠檬酸缓冲溶液（4.2.16）溶解并定容至1000mL，混

匀。

4.2.18底物溶液乙：移取1.5mL30%过氧化氢（4.2.11），用柠檬酸缓冲溶液（4.2.16）稀释至1000mL。

4.2.19反应终止液：准确移取22mL浓硫酸缓慢加入至178mL水中，混匀。

4.2.20赭曲霉毒素A标准储备溶液（100μg/mL）：准确称取赭曲霉毒素A（CAS号：303-47-9，纯

度≥99%）标准品适量（精确至0.01mg）于10mL容量瓶中，用甲醇（4.2.2）溶解并定容至刻度，混

匀，于－18℃以下避光保存，有效期12个月。或购买有证标准物质。

4.2.21标准中间溶液（5.0μg/mL）：准确移取赭曲霉毒素A标准储备溶液（4.2.20）1mL，置于20mL

容量瓶中，用甲醇（4.2.2）稀释至刻度，混匀。于－18℃以下避光保存，有效期3个月。

4.2.22标准系列溶液：准确移取质量标准中间溶液（4.2.21），用提取液（4.2.14）稀释定容，混匀，

配制成质量浓度分别为0μg/L、0.05μg/L、0.1μg/L、0.2μg/L、1μg/L、2μg/L、4μg/L标准系列溶液。

4℃~8℃下避光保存，有效期7天。

4.2.23包被抗体的聚苯乙烯微量反应板：24孔或48孔。

4.2.24酶标抗原溶液：OA与辣根过氧化酶结合物。

4.2.25抗体溶液：OA抗体。

4.3仪器设备

4.3.1酶标测定仪：带450nm波长。

4.3.2分析天平