大孔吸附树脂分离纯化金丝小枣总黄酮工艺研究.docx

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大孔吸附树脂分离纯化金丝小枣总黄酮工艺研究

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师仁丽++于文龙++梁娜+张群+王向红

摘要：以静态吸附与解吸率为指标，考察了6种大孔吸附树脂对金丝小枣总黄酮的分离纯化效果，从而筛选出1种效果最佳的大孔吸附树脂。采用正交优化的方法确定出纯化金丝小枣总黄酮的工艺参数。确定AB-8树脂对金丝小枣总黄酮的分离纯化效果最好，其对金丝小枣总黄酮的吸附率可达88.57%，解吸率为99.71%。最佳工艺条件为上样液pH值为3、吸附流速3mL/min、上样浓度0.35mg/mL、洗脱剂为70%乙醇，此时总黄酮收率可达到9339%。同时，绘制了泄露曲线与解吸曲线，确定了最佳上样体积与洗脱剂用量分别为40、70mL。

关键词：金丝小枣；黄酮；大孔吸附树脂；纯化

：R284.2文献标志码：A：1002-1302（2017）08-0172-04

枣（ZiziphusjujubaMill.）是鼠李科（Rhamnaceae）枣属植物的成熟果实，原产于中国，栽培已有4000年的历史[1]。红枣营养价值高，且有很高的药用价值，是营养和医疗保健的优质滋补果品，是很重要的食用材料和经济产品，享有“营养保健丸、木本粮食”的美誉[2]。由于其具有抗氧化、抗炎、抗癌、保护心肌等功能而被用作营养食品和传统药品[3]。金丝小枣广泛分布在河北沧州一带，果核细小、可食率达97%、含可溶性固形物40%～45%、制干率约55%、质脆细嫩、品质优良等特点[4]。

黄酮类化合物是植物产生的一类次生代谢产物，是一类重要的天然化合物，对人体健康起着重要的作用。大量研究表明黄酮类物质具有降血压、降血脂、增大心脏血流量、增强心脏收缩、减少心脏搏动数、止咳祛痰、抗菌消炎的功效[5]。

在提取的粗黄酮中一般含有多种杂质，如糖类、色素、蛋白质、氨基酸等。为了提高黄酮纯度，需要对粗提物进行进一步的分离纯化，从而提高黄酮含量。目前，使用的黄酮类化合物纯化方法很多，主要有柱层析、薄层层析、气相层析、溶剂萃取、沉淀法等方法，在工业生产中均存在一定的缺点。大孔吸附树脂纯化法是目前使用最为广泛的纯化方法[6-7]。该技术具有生产成本低、周期短、效率高、可再生等优点，所以在天然产物有效成分的分离技术中有较好的应用发展趋势。

本试验选取6种在黄酮类化合物纯化中应用较为广泛的大孔吸附树脂，通过研究金丝小枣黄酮类化合物在不同树脂上的静态吸附、解吸效果，从而选择出1种精制金丝小枣黄酮较理想的吸附树脂，并采用正交优化法对该树脂的各种纯化工艺参数进行研究，以期为金丝小枣黄酮的分离纯化提供科学依据。

1材料与方法

1.1材料与仪器

金丝小枣，购自河北省沧州；芸香苷对照品（≥99%），购自上海源叶生物科技有限公司；石油醚（60～90℃）、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、盐酸，购自天津市天力试剂；AB-8树脂、D-101树脂、HPD-600树脂、ADS-17树脂、HPD-826树脂、聚酰胺树脂，购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司；101-OAB电热古鼓风干燥箱，购自天津市泰斯特仪器有限公司；UV-2008H型紫外可见风光光度计，购自上海UNIC公司；HT-300BQ型数控超声提取器，购自天津市瑞普电子仪器公司；DZWK-C型恒温水浴锅，购自北京市光明医疗仪器厂；BS-214D型电子分析天平，购自Sartorius公司；TGL-16M快速离心机，购自浙江金坛市杰瑞尔电器有限公司；层析柱，购自华美仪器公司；RE-52A型旋转蒸发仪，购自上海亚荣生化仪器厂；真空恒流泵，购自上海沪粤明科学仪器有限公司；自动收集器，购自上海嘉鹏科技有限公司；FZG-4A型真空干燥箱，购自南京天利制药设备有限公司。

1.2原料預处理

将金丝小枣洗净烘干、去核、取1g加10mL石油醚（60～90℃），超声（180W，45℃）30min，置于60℃水浴锅中挥发干，加入20mL70%乙醇，超声50min，取上层清液，重复3次，最后合并清液，在3500r/min的离心条件下，离心10min，弃去沉淀，得到总黄酮粗提液。旋转蒸发去除乙醇，至无醇味，加入蒸馏水定容至500mL得到样品液。

1.3芸香苷标准曲线的绘制

准确称取干燥至恒质量的芸香苷标准品1mg，置于10mL容量瓶中，用95%乙醇溶解至刻度、摇匀、得到1mg/mL的芸香苷标准液。分别精密吸取标准液0、1.0、20、3.0、4.0、5.0mL，置于5mL容量瓶中，用95%乙醇定容至刻度，加入5%NaNO2溶液0.5mL。摇匀，静置6min；再加入10%Al（NO3）3溶液0.5mL，混匀，静置6min；最后加入4%NaOH溶液4mL，摇匀，放置10min，以不加标准品的空白作参比，测定510nm处吸光度（D