糖的提取分离结构测定.ppt

三、单糖的鉴定

一般是将苷键全水解，用PC检出单糖的种类，糖类的PC常用的展开剂大多为含水的溶剂系统，如正丁醇-醋酸-水(4:1:5)，EtOAc-吡啶-水(2:1:2)等，经显色后用薄层扫描法求得各种糖的分子比。用GC或HPLC对单糖定性定量，GC常以甘露醇或肌醇为内标，用已知单糖作为对照品。NMR谱，也可以有效地鉴定苷分子中糖的种类。第31页,共38页，5月，星期六，2024年，5月四、糖的连接位置的测定

1.甲基化法：将被测物全甲基化，水解苷键，用GC定性定量分析，具有游离羟基的部位是糖的连接位点。2.1H-NMR法：根据乙酰化后的质子化学位移判断糖的连接位点。3.13C-NMR法：通过苷化位移，推断糖的连接位点。第32页,共38页，5月，星期六，2024年，5月五、糖链连接顺序的确定

1.部分水解法：将糖链水解成较小片段（低聚糖），然后分析片段推断糖链的结构。2.质谱法根据质谱中的裂解规律和裂解碎片推测糖链的连接顺序。3.NMR和2D-NMR法。第33页,共38页，5月，星期六，2024年，5月2.质谱法FDMS、FABMS等。优点：不必制备衍生物,用量小,准确,简便。第34页,共38页，5月，星期六，2024年，5月是将糖及其苷类衍生物全乙酰化后，测定观察两糖之间质子的远程偶合或NOE效应，确定糖的连接顺序。3.NMR和2D-NMR法。通过HMBC可确定糖的连接位点。第35页,共38页，5月，星期六，2024年，5月六、苷键构型及氧环的确定

1.苷键构型确定方法包括：1H-NMR法、酶解法、分子旋光差法等。1H-NMR法1利用端基质子的偶合常数2利用α-苷键和β-苷键的端基碳的化学位移差别3利用2D-NMR谱酶解法如麦芽糖酶一般能水解的为α-苷键，能被苦杏仁苷酶水解的大多为β-苷键第36页,共38页，5月，星期六，2024年，5月2.氧环测定包括：13C-NMR法、甲醇解法、Smith降解法等。通常呋喃糖C3和C5位的化学位移明显偏大，多数大于80第37页,共38页，5月，星期六，2024年，5月感谢大家观看第38页,共38页，5月，星期六，2024年，5月关于糖的提取分离结构测定一、提取

单糖、低聚糖及苷类化合物常用水或醇提取，然后用不同的有机溶剂萃取得到不同极性的化合物。多糖常用热水、稀碱或稀酸溶液进行提取。植物体内苷常与水解酶共存，所以要杀酶或抑制酶的活性。第2页,共38页，5月，星期六，2024年，5月提取流程第3页,共38页，5月，星期六，2024年，5月二、分离1.季铵盐沉淀法与酸性多糖形成不溶性沉淀，使其分离。常用季氨盐有十六烷基三甲胺溴化物及其氢氧化物和十六烷基吡啶。提高溶液PH值或加入硼砂缓冲液，也可沉淀分离中性多糖。第4页,共38页，5月，星期六，2024年，5月2.分级沉淀或分级溶解法按比例由小到大的顺序向多糖溶液中加入甲醇或乙醇或丙酮，收集不同浓度下析出的沉淀，反复溶解与沉淀。为了多糖的稳定，一般在PH7时进行，酸性多糖在PH2-4时进行。第5页,共38页，5月，星期六，2024年，5月分级沉淀法得到的多糖，常含有较多的蛋白质，需将其去除方法：选择使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂（如酚、三氯醋酸、鞣质等）处理sevag法：（用氯仿:丁醇5:1混合）酶解法：（蛋白水解酶，常与sevag法合用）三氟三氯乙烷法三氯醋酸法蛋白质的去除第6页,共38页，5月，星期六，2024年，5月3.离子交换色谱常用交换剂为阳离子或阴离子交换纤维素。阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和粘多糖。中性多糖与硼酸络合后可增加酸性，可被阳离子交换纤维素吸附酸性基团多的吸附力强，对于线性分子，分子量大的比小的吸附力强，直链分子比支链分子易吸附。第7页,共38页，5月，星期六，2024年，5月4.凝胶柱色谱

分子筛原理，按照分子量的大小不同进行分离。常用葡聚糖凝胶（sephadexG）5.纤维素柱色谱（吸附＋分配）6.制备性区域电泳（分子大小、形状、电荷不同，在电场作用下的迁移速率不同）第8页,共38页，5月，星期六，2024年，5月第六节糖的核磁共振性质

第9页,共38页，5月，星期六，2024年，5月一、糖的1H-NMR性质

1.1H-NMR化学位移糖的端基质子信号在δ4.3~6.0甲基五碳糖的甲基信号在δ1.0左右