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浙江省第六届大学生生命科学学科竞赛实验记录序号:53
实验时间:9月22日15:00-20:00请勿透露学校、教师和个人信息
大鼠心肌组织ET-1的表达测定预实验
【实验结果】
大鼠心肌组织ET-1表达测定结果如图1所示:
1.6
)1.4
t
C
△1.2
△
-
21
(
d
l
o0.8
f
A
N0.6
R
m
0.4
1
-
T
E0.2
0
正常组模型组OJP1-100组OJP1-300组普萘洛尔组
图1OJP1对大鼠心肌组织ET-1表达的影响(,n=3)
XS
【讨论】
由结果可见,OJP1-100组和普萘洛尔组的表达极低,考虑可能由于:引物的储存浓度是100µmol/L,
而工作浓度为10µmol/L,我们使用前忘记稀释,不得不重新配体系,但引物稀释时混合不均匀,导致荧
光定量PCR反应无法完全进行。正常组大鼠ET-1表达明显高于其他给药组,尤其高于模型组,可能在加
样时将模型组样品和正常组样品混淆,也可能是加样时由于操作原因使试剂遭到污染,以致反应体系出现
过高的情况。而且同一组的3个复孔数据差异非常大,考虑大家做PCR次数不多,对于微量试剂的吸取和
混匀不熟练,可能是本次实验结果不理想的原因。接下去正式实验需要注意改进的有:1)体系配制要在
冰上进行;2)加样时要注意,避免体系受到污染,导致特征曲线出现多重峰,得到不准确的结果;3)试
剂准备和样品处理时应使用超净工作台,以防止对环境的污染;4)配制反应体系时,应注意移液器的使
用方法,所有的液体都要缓慢加至管底,不要加至管壁,所有液体的混匀要用振荡器进行,不能用移液器
吹打,反应体系配制完毕后低速离心数秒,避免产生气泡。
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