基于高稳定性ssDNA-CuNCs荧光生物传感新方法.pdf

摘要

脱氧核糖核酸（DNA）具有纳米尺寸的几何结构、特异性的分子识别能力等优

越性能，是合成荧光金属纳米材料的理想模板之一。荧光铜纳米团簇作为一种新型

的荧光金属纳米材料，凭借其独特的物理化学性质及其在生物成像、生物传感和环

境监测等领域的应用潜力，引起了广泛的研究关注。其中，DNA模板铜纳米团簇

（DNA-CuNCs）具有成本低、易于合成和生物相容性好等优点，然而，DNA-CuNCs

的稳定性仍有待进一步提高。本文通过调控DNA模板的序列和结构，设计了富含

腺嘌呤-胸腺嘧啶（AT-rich）的单链DNA（ssDNA），并以此作为合成模板，制备

了高稳定性的荧光铜纳米团簇（ssDNA-CuNCs）。以制备的ssDNA-CuNCs作为荧

光探针，构建了一系列简便的荧光传感方法，用于四环素（TC）、胰蛋白酶和α-

葡萄糖苷酶（α-Glu）的灵敏检测。主要研究内容如下：

1．设计了富含腺嘌呤-胸腺嘧啶（AT-rich）的单链DNA（ssDNA），以设计的

ssDNA作为模板，抗坏血酸（AA）作为还原剂，在室温条件下1min内合成了

ssDNA-CuNCs。以ssDNA-CuNCs作为荧光探针，成功构建了一种简单、无标记和

响应速度快的荧光传感新方法实现对TC的灵敏检测。在TC存在时，由于

ssDNA-CuNCs与TC之间的光谱重叠，ssDNA-CuNCs的荧光强度通过内滤效应被

显著猝灭。在优化的条件下，TC的线性范围为2nmol/L~30μmol/L，检出限为0.5

nmol/L，回收率为98.2%~104.0%，相对标准差（RSDs）在2.8%~3.6%之间。

2．为了进一步提高荧光ssDNA-CuNCs的稳定性，制备了阳离子聚电解质修饰

的ssDNA-CuNCs，构建了一种新型的荧光传感平台用于胰蛋白酶的测定。聚二烯

二甲基氯化铵溶液（PDDA）作为一种典型的阳离子聚电解质，可以与荧光

ssDNA-CuNCs发生静电吸引相互作用，结合后形成PDDA-ssDNA-CuNCs纳米复合

物，使ssDNA-CuNCs在580nm的荧光强度和稳定性显著提高。荧光增强主要归因

于PDDA和ssDNA模板之间发生的静电相互作用，使ssDNA模板的构象发生改变，

为稳定和保护ssDNA-CuNCs提供了一个更好的微环境。以带正电荷的鱼精蛋白作

为传感模型，该方法实现了胰蛋白酶的灵敏检测，线性范围为0.5ng/mL~20ng/mL，

检出限为0.17ng/mL，回收率98.7%~105.0%，RSDs在2.9%~3.4%之间。

3．利用PDDA-ssDNA-CuNCs纳米复合物作为荧光探针，MnO2纳米片作为荧

光猝灭剂，开发了一种信号增强型的荧光生物传感方法用于α-Glu的灵敏检测。当

二氧化锰（MnO）纳米片存在时，PDDA-ssDNA-CuNCs纳米复合物与MnO纳米

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片发生相互作用导致PDDA-ssDNA-CuNCs纳米复合物的荧光强度显著降低。另一

方面，α-Glu的催化水解反应底物2-O-α-D-葡萄糖基-L-抗坏血酸（AAG）生成了

AA。随后，产生的AA将MnO2纳米片还原为Mn2+，反应体系的荧光信号得到恢

复。该方法实现了对α-Glu活性的灵敏检测，α-Glu的线性范围为0.01U/mL~2.5

U/mL，检出限为0.003U/mL。此外，该方法已成功用于血清样品中α-Glu活性的测

定。

关键词：荧光生物传感方法；ssDNA-CuNCs；四环素；胰蛋白酶；α-葡萄糖苷

酶

Abstract

Deoxyribonucleicacid(DNA)isoneoftheide