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磁珠法基因组

磁珠法基因组DNA提取试剂盒(细胞)

B015-V001IMagneticGenomicDNAKit(cell)

产品简介

本试剂盒采用具有独特分离作用的超顺磁珠和独特的缓冲液系统，从细胞中分离纯化高质量基因组DNA。样品中的DNA在裂解液的作用下被释放出来，特异性结合在特殊包被的超顺磁珠上，在外加磁场的吸附下，轻松完成对核酸的吸附固定，通过4次的洗涤过程将污染物除去，最后在洗脱液的作用下DNA从磁珠上被洗下而被收集。整个过程不涉及有机试剂和蛋白酶K，不带来抑制物，不需要离心，安全、便捷，提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。

使用本试剂盒纯化的DNA可适用于各种常规操作，包括测序、酶切、PCR、文库构建、Southern杂交、SNPs等实验。

试剂盒组成

产品组成

24rxns

48rxns

96rxns

bufferCGP

13ml

25ml

50ml

bufferCGL

13ml

25mL

50mL

Megbeads

0.8ml

1.5mL

3mL

BufferCGW0

25ml

50mL

100mL

BufferCGWI

20mL

40mL

80mL

BufferEB

2.5mL

5mL

10mL

保存条件

Megbeads：4℃;其它组分：室温，可稳定保存12个月

适用范围

培养细胞：5×101-5×105个

注意事项

◆样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降；

◆需要自备材料：无菌水、异丙醇、磁铁或磁架、1.5mL离心管(最好低吸附的离心管)；PBS。

◆已加入抗凝剂的血液样品可在2-8℃储存不超过3天（推荐使用EDTA作为抗凝剂），长期贮存请置于-70℃;

◆整个过程请勿离心，以免磁珠不可逆聚集而影响提取效果。

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实验准备

◆56℃加热源

◆磁珠用前一定要充分混匀；

◆使用前需在BufferCGWI中加入相应体积的无水乙醇。

操作步骤

1.样本前处理：

细胞用PBS洗两次后，6000rpm/min离心3min，弃上清，加入500ulBufferCGP重悬沉淀，12000rpm/min离心1min，弃上清，取沉淀备用。

2.裂解结合：在细胞沉淀中，加入500μLBufferCGL，室温放置5-10min，再加入500μl异丙醇和30ul磁珠悬浮液(MB)（使用前充分重悬），颠倒混匀，室温放置5min（期间不时颠倒混匀）；将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。

3.漂洗:

(1)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500μlBufferCGW0,涡旋振荡5s，重悬磁珠，将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体，重复该步骤1次。

(2)将离心管从磁力架上取下，向离心管中加入500μlBufferCGWI,涡旋振荡5s，重悬磁珠,将离心管放置于磁力架上，待磁珠完全吸附后吸弃液体。重复该步骤一次，待磁珠完全吸附后吸弃液体（液体一定要弃

尽，不然残留会影响下游实验），晾干2min。

4.洗脱：将离心管从磁力架上取下加入50-100μlBufferEB，涡旋振荡结合移液器吹打，充分吹散磁珠（一定要完全吹散磁珠，若未充分重悬会影响DNA得率），56℃放置5min（每隔2min振荡混匀重悬磁珠）,置于磁力架上，将上清DNA转移至一新的离心管中，放入-20℃保存备用，保质期为2年。

纯度效果评价

通过测定洗脱液中DNA的A260来确定RNA产量，通常情况下A260值在0.1～1.0之间数据比较可信。如果不在此范围内，请稀释或浓缩样品调整；通过测定洗脱液中RNA的A280和A230来确定DNA纯度，A260/A280比值在1.8-2.0之间，小于1.8表示可能有蛋白质污染。

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操作简图

预处理：PBS洗涤两次，离心弃上清，加入500μlbuffer

CGP，重悬沉淀，12000rpm，离心弃上清沉淀备用

裂解：在细胞沉淀中加入500μlBufferCGL,吹打重悬细胞，室温放置5-10min，期间不时颠倒混匀。

结合：加入相应体积的异丙醇和磁珠，颠倒混匀，室温放置

5min（期间颠倒混匀数次）,

于磁力架上吸弃上清。

洗涤I：加入500μlbufferCGW0，涡旋振荡重悬磁珠，再次置于磁力架上，吸弃上清，重复该步骤一次。

洗涤II：加入500μlBufferCGWI，涡旋振荡重悬磁珠，再次置于磁力架上，吸弃上清,重复该步