EC呼吸代谢改变和ROS生成减少文献翻译终稿.pdf

CELLFOOD提高内皮细胞呼吸代谢并抑制缺氧诱导氧自由基产生

【摘要】

内皮细胞线粒体是产生ATP的主要部位，通过调节细胞内氧自由基的动态平衡来控制内皮功

能。内皮细胞需要充足的氧供。缺氧及富氧环境都可能导致氧自由基的过量产生，从而导致

氧化应激、线粒体损伤及内皮功能异常。Cellfood是一种抗氧化合剂，它能够调节携氧能

力及线粒体呼吸代谢及体外实验中调节EC缺氧环境诱导的氧自由基产生。我们的实验目的

是研究CELLFOOD抗氧化的功能和机制。实验使用Clark’s电极来测量人类脐静脉内皮细胞和

ECV-304细胞的氧气消耗量。在使用cellfood最初的几分钟内，氧气消耗量增加，同时伴有

线粒体氧化能力的增强和细胞活力的增强。在EC暴露在CF八天时，我们也观察到同样的

现象。氧气消耗量的增加同时伴随细胞内ATP产生增加和LDH比例的保持。通过上调Mn

超氧化物歧化酶（一种保护线粒体功能的抗氧化物），CF显著地抑制了缺氧诱导氧自由基的

产生。EC的缺氧应答被HIF-1a调控，HIF-1a的活性被CF减弱，伴随而来的是Mn-SOD上

调。结论：CF通过改善EC呼吸代谢和促进EC的抗氧化的机制来保护内皮细胞的功能。

【引言】

内皮参与了很多生理反应和人类疾病，内皮细胞在疾病局部病灶的形成过程中扮演非常重

要的的作用。特别是EC能够调节血管功能的稳定。所以保护内皮细胞的功能、形态和活力

是非常的关键。EC对氧气非常敏感，同时它也拥有一种可以适应氧气变化的机制。EC的

氧感受器非常敏感，一旦遇到缺氧环境时，EC会上调HIF-1a。线粒体作为细胞主要的能量

来源，维持细胞能量平衡。内皮不是主要的能量消耗器官，例如血管内皮通常在一种休眠状

态。尽管如此，EC仍有非常强大的线粒体网络，这说明了在维持EC的生理性氧气代谢和

生物能量方面，线粒体起到很重要的作用。此外，EC线粒体可能参与心血管疾病的发生发

展的病理生理学变化。触发内皮损伤的一个重要的启动因子是氧化应激，它是由增加的氧自

由基和细胞内抗氧化活动不足所产生的一种不平衡情况引起的。尽管氧化损伤和心血管功能

异常的量效关系尚未完全明确，但过量的氧自由基的产生和血管内抗氧化物质缺乏，这两种

情况产生的氧化应激都是多种心血管疾病产生的共同因素这点是明确的。

EC线粒体呼吸链量很小但是确是氧自由基重要的目标，可以导致线粒体不可逆损伤。除

外线粒体代谢和糖酵解是EC能量代谢产生ATP的关键以外，内皮功能异常似乎首先和线

粒体损伤有关。目前，将抗氧化物质直接运输到线粒体的手段有新的发展。Cellfood是一种

食物来源的DSO结合多种矿物质、氨基酸和酶组成的有抗氧化作用的合剂。尽管配方的

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复杂性妨碍了我们分析那种物质是和临床疗效最有关系的成分，但是无疑整体的配方是有效

地。在实验中，我们研究了CF在如下几方面的的作用和机理：对ECV304和HUVEC的线

粒体功能、体外呼吸代谢、氧自由基产生、Mn超氧化物歧化酶诱导和HIF-1a途径。

【材料和方法】

{细胞培养}

HUVEC是从人类脐带组织中用胶原酶分离出并培养在1%凝胶覆盖的烧瓶中（Falcon，

BectonDickinson,Bedford,MA,USA)，使用无内毒素的Medium199（Biowhittaker,Cambrex

BioScience,Verviers,Belgium)，含有20%热灭活胎牛血清（FBS,Hyclone,Logna,UT,USA),1%

牛视网膜生长因子，90ul/ml肝素，100I.U/ml青霉素和100ug/ml链霉素

（Biochrom,Berlin,Germany)(CM)。所有的实验都是使用HUVEC(一-四代）ECV-304内皮细

胞线（AYCC）是培养在添加了10%FBS的Medium199中。

{缺氧处理}

HUVEC培养在由C-chamber控制了温度和适度的环境中（Biospherix,Redfield,NY,USA),

空气的成分是1%氧气，5%CO，90%N。