《生物技术制药》第6章植物细胞工程制药2.pptx

第6章植物细胞工程制药;6.1基本概念

TotipotencyExplantMutant次级代谢产物

6.2植物细胞工程发展简史

6.3植物细胞的形态及生理特性

;6.4.1植物材料的准备

无杂菌材料：培养前必须进行严格的灭菌处理

6.4.2培养基制备

6.4.3培养方法选择;;;;;;赤霉素：

刺激叶和芽的生长，加速细胞的伸长。

脱落酸：

引起芽休眠、叶子脱落和抑制生长。

乙烯：

使植物横向增长，促使果实成熟和花的枯萎。;;;;6.4.3培养方法;固体培养;;;;液体培养;;（1）成批培养法

;;（2）半连续培养法;（3）连续培养法;采用的固定化反应器有网状多孔板、尼龙网套和中孔纤维膜等多种类型。

优点：

a.细胞位置固定，易于获得高密度细胞群体；

b.易于控制培养条件及获得较高含量的次级代谢产物。

c.易于维持细胞间物理化学梯度；

d.有利于细胞组织化；;6.4小结（植物细胞培养的基本技术）;思考题;4.植物细胞培养中有些研究必须在固体培养基上进行，最常用的固化剂是——。

A.明胶B.淀粉C.琼脂D.硅胶

5.最适合植物细胞培养的生物反应器是——。

A.机械搅拌式B.气升式C.转鼓式D.鼓泡塔式

6.植物细胞培养应用最广泛的培养基是——。

A.MEM培养基B.DMEN培养基C.BME培养基;二、填空

1.植物细胞培养的最适温度是——，光照以每天——为宜。

2.日本科学家成功开发的第一个植物细胞工程商品是——。

三、名词解释

成批培养法连续培养法

四、问答

植物细胞培养的培养基由哪些主要成分组成？

植物细胞大规模培养的主要方法及其特点是什么？

;6.5影响植物次级代谢产物累积的因素;;（1）培养环境的内在因素

①接种和诱导：外植体大小、细胞密度及营养成分能显著次级代谢产物的产率。

②基本培养基成分：物质基础

;磷：低磷有利于次级代谢产物的累积，缺乏磷会导致细胞生物量的大幅度降低。

氮：两种主要氮源，即NO3-和NH4+

铜：邻二酚、对二酚、抗坏血酸氧化酶活性基团，是次级代谢产物累积的必要元素，还可作为非生物诱导子（紫草紫草宁）。

;③碳源

使用最多的碳源是糖???，其影响主要取决于所使用的糖类的种类、浓度及细胞次级代谢产物的生物合成过程。

糖的作用：延长稳定期，蔗糖分解产物所产生的对内源性生长素合成的抑制作用，增强磷酸戊糖途径有关酶的活性。;⑤O2和pH

;⑥渗出物

初级代谢产物、次级代谢产物、某些酸性物质、醇类和水解蛋白或活性蛋白等。

细胞分泌产物的量也取决于发育阶段。如多叶羽扁豆悬浮细胞培养中，在活跃的生长期初期，酶的分泌量就达到了稳定期的水平。;第一步使用适合细胞生长的培养基（生长培养基），营养丰富---使用肌醇、维生素类成分，使用生长素刺激细胞生长。

第二步使用适合次级代谢产物合成的培养基（生产培养基）---具有低含量的硝酸盐和磷酸盐，并含有较低的糖分或少量的碳源，加入细胞分裂素便于次级代谢产物的产生。;植物抗毒素：在植物防御系统内能对抗微生物进攻的某些次级代谢产物。如豌豆产生的豌豆素、大豆的菜豆蛋白等。植物抗毒素不能在健康的正常的组织（有微量存在）中产生，只有细胞受刺激时才能产生或产量增加。

诱导子：触发形成植物抗毒素信号的物质。包括侵染植物的微生物、植物细胞内的分子、光、外部的培养条件等。

诱导子的分类和作用机制详见6.7.1……;（4）培养环境的外部因素;6.5小结（影响植物次级代谢产物累积的因素）;思考题;6.6植物细胞培养的生物反应器;;;6.6.1机械搅拌式生物反应器

6.6.2鼓泡塔生物反应器

6.6.3气升式生物反应器

6.6.4转鼓式生物反应器

6.6.5固定化细胞生物反应器;通常是在微生物发酵罐的基础上改进设计的。

优点：易控制温度、pH、溶氧及营养物质浓度，混合均匀。

搅拌装置要减少剪切力，一般改叶轮式为螺旋式。

;;6.6.2鼓泡塔生物反应器;6.6.3气升式生物反应器（图6-3d3）;气升式生物反应器;;6.6.4转鼓式生物反应器;6.6.5固定化细胞生物反应器;6.6.6各种植物生物反应器的性能比较;讨论;6.7植物细胞制药的进展与展望;;;;

;6.7.2前体饲喂;基本出发点：

在细胞外创造一个次级代谢产物的贮存单元。