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NatA复合体的功能及氧化钇纳米颗粒植物毒性的研究

中文摘要

蛋白质N末端的乙酰化修饰是真核生物蛋白质组中发现的最丰富的修饰之一，该修

饰由N末端乙酰转移酶催化完成。N末端乙酰转移酶以乙酰辅酶A作为乙酰基团的供

体，将激活的乙酰基部分转移到蛋白质的N末端α氨基上。蛋白质N末端乙酰化修饰

屏蔽了蛋白质N末端氨基所带的正电荷，改变了蛋白质N末端的极性进而影响蛋白功

能。N末端乙酰化修饰可以调控蛋白质的半衰期、影响蛋白质折叠、调控蛋白质与蛋白

质的相互作用和影响蛋白质的细胞质膜定位。蛋白质N末端乙酰化主要是共翻译修饰的

过程，N末端乙酰转移酶与核糖体锚定在一起，当蛋白质刚刚被翻译出20－50个氨基

酸的新生肽链时，N末端乙酰转移酶催化产生N末端乙酰化修饰。与蛋白质赖氨酸的乙

酰化修饰不同，N末端乙酰化是不可逆的修饰过程。

NatA复合体是真核生物中主要的N末端乙酰转移酶复合体，它包含一个催化亚单

位Naa10和三个辅助亚单位Naa15、HYPK和Naa50，当新生肽链N末端的起始甲硫氨

酸被氨肽酶切除，新形成的N末端的氨基酸残基是Ser、Ala、Thr、Gly、Val或者Cys

时，该新生肽链倾向被NatA复合体识别，进行N末端乙酰化修饰。在模式植物拟南芥

中，NatA复合体在生长发育和逆境响应中发挥重要的作用。拟南芥中Naa10和Naa15

的完全缺失会导致胚胎致死表型，也会导致胚乳细胞化严重延迟和不完全细胞化。NatA

复合体通过对SNC1蛋白的N末端乙酰化修饰，创造N末端的降解信号，介导SNC1

的降解，导致植物对病原菌的敏感表型。此外，在干旱胁迫下，拟南芥中蛋白质N末端

乙酰化修饰显著降低，NatA复合体的丰度也受到脱落酸处理的快速下调。到目前为止，

拟南芥中NatA复合体与底物蛋白之间的对应关系尚不明确。

在本文的研究中，我们利用邻近标记技术结合N末端乙酰化组学数据，对NatA复

合体的底物及识别底物的规律进行了探索。结果表明，在检测到的NatA复合体的底物

蛋白中，当起始甲硫氨酸被切除后，新形成的N末端氨基酸主要是Ala、Ser和Gly，这

与之前人们的推测一致。但是，NatA复合体的底物中还包括起始甲硫氨酸保留的底物，

并且第二个氨基酸主要是Glu和Asp。这些起始甲硫氨酸保留的底物占检测到的底物数

目的32.9%，而之前这些蛋白被推测是NatB复合体的底物。因此，相较于在酵母和人

细胞中，拟南芥NatA复合体的底物识别范围可能更广。

在拟南芥中，Naa50蛋白作为NatA复合体可能的组分，我们也对Naa50蛋白的功

能和表达调控进行了分析。结果表明，Naa50蛋白缺失突变体naa50-1相较于野生型拟

南芥表现出明显的主根生长缺陷。融合GFP标签的Naa50基因组DNA可以完全恢复

naa50-1突变体主根发育缺陷的表型，而Naa50基因自身启动子驱动融合GFP标签的

CDS序列仅部分恢复了naa50-1突变体主根发育缺陷的表型。进一步研究表明，Naa50

基因的内含子1的缺失导致Naa50在根尖分生区以及伸长区和成熟区的表皮、皮层和内

皮层中的表达缺失，而内含子2的缺失降低了Naa50在根伸长区和成熟区的表皮，皮层

和内皮层中的表达。Naa50基因自身启动子与内含子1和2共同促进Naa50在萼片维管

束、花丝、花粉和柱头中的表达；然而，两个内含子对成熟莲座叶中Naa50的表达都没

有促进作用。因此，Naa50基因中的内含子1和2作为增强子，促进Naa50的组织特异

性表达。

对氧化钇纳米颗粒（YO-NPs）的植物毒性分析过程中，发现YO-NPs处理拟南

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芥幼苗后，产生了与Naa50蛋白缺失突变体相似的表型。浓度超过2mM的YO-NPs

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显著抑制了拟南芥幼苗根的生长。YO-NPs处理使Naa50蛋白的丰度轻微上调，使