淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶的产生菌株筛选.pdfVIP

1.淀粉酶产生菌的分离与纯化

实验原理

淀粉是由葡萄糖通过α-1，4糖苷键构成的直链淀粉和α-1，6位有分支的支链淀粉组

成的。按照水解淀粉方式的不同，主要的淀粉酶可分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀

粉酶和解枝酶（或异淀粉酶）4大类。产淀粉酶的微生物有细菌、霉菌和酵母菌等。利用淀

粉遇碘液变为蓝色的特性，将分离的芽孢杆菌（或其他微生物）接种在含有淀粉的固体培养

基表面进行培养，利用滴加碘液后菌落周围出现的透明圈判断该菌是否产生淀粉酶及初步判

断淀粉酶活力的高低。

实验材料和用具

土壤样品或其他富含淀粉质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、淀粉培养基平板、

无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游

标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等

操作步骤

分离

1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液；

2）取1：10土壤悬液5ml，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75-80℃

水浴中热处理10min，以杀死非芽孢细菌；

3）取加热处理过的土壤悬液100-200μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基

平板，将平板倒置，于30-32℃培养24-48h；

4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取

少许菌苔涂片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。

筛选

1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种淀粉斜面培养

基，再转接淀粉培养基平板，30-32℃培养24-48h。在平板上滴加稀碘液（或卢

戈氏碘液）后测定水解圈直径与菌苔直径的比值。

2）水解圈大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育或酶发酵、

酶活力测定菌株。

注意事项

1）土壤悬液加热处理的温度和时间应准确控制。

2）点接淀粉培养基平板时，接种量及接种面积要基本相同。

2.蛋白酶产生菌的分离与纯化

实验原理

许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土

壤样品（或其他样品）悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽

孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。也可直接将细

菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。

实验材料和用具

土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水

（带玻璃珠）、芽孢染色液；显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液

管、无菌试管、量筒等。

操作步骤

分离

1）采集土壤样品，用无菌水制备1：10土壤悬液；

2）取1：10土壤悬液5ml，注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75-80℃水浴中热

处理10min，以杀死非芽孢细菌；

3）取加热处理过的土壤悬液100-200μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将

平板倒置，于30-32℃培养24-48h；

4）对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂

片，做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。

筛选

1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种含酪蛋白的斜面培养基，

再点接于含酪蛋白的平板，30-32℃培养24-48h，测定平板上菌苔直径和水解圈直径。

2）水解圈直径与菌落直径比值大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育

或酶发酵、酶活力测定菌株。

注意事项

1）土壤悬液加热处理的温度和时间应准确控制。

2）点接含酪蛋白的平板时，接种量及接种面积要基本相同。

附：相关培养基

1、酪素培养基：牛肉膏0.3g、NaCl0.5g，酪素1.0g，琼脂2.0g，水100mL，pH7.6-8.0。

配制方法：称取酪素1g,先用少量2%NaOH润湿，玻璃棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水

浴中加热并搅拌，至完全溶解，补足水量至100mL,加入其他成分，调整pH值，灭菌备用。

2、产蛋白酶发酵培养基：玉米粉6.0g，豆饼粉4.0g，NaHPO0.4g，KHPO0.03g，NaCO