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土壤微生物量氮的测定

1范围

本标准规定了土壤微生物量氮的测定方法。

本标准适用于各类土壤微生物量氮的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不住日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T1121.1土壤检测第一部分：土壤样品的采集、处理和贮存

3原理

新鲜土样经氯仿熏蒸24h后，土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物量氮，用硫酸钾溶液提取微生物量氮，测定提取液中氮含量，根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤氮含量的差值及转换系数，计算土壤微生物量氮。

4试剂和溶液

除非另有说明外，本方法均使用符合国家标准的分析纯试剂，分析用水为GB/T6682规定的三级水。

4.1氯仿（CHCl3）。

4.1.1去乙醇氯仿制备

市售氯仿一般含有少量乙醇作为稳定剂，使用前须将乙醇去除。方法是量取适量的氯仿和二级水按1:2的比例置入分液漏斗中，充分震摇1min并静置分层后，慢慢放出底层氯仿于干燥的烧杯中，重复洗涤3次，得到无乙醇氯仿，向其中加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。纯化后的氯仿置于暗色试剂瓶中，在4℃、黑暗条件下保存。

注意：氯仿具有致癌作用，所有操作必须在通风橱中进行。

4.2氢氧化钠（NaOH）。

4.3硫酸钾（K2SO4）。

4.4硫酸铜（CuSO4）。

4.5硼酸（H3BO3）。

4.6浓硫酸（H2SO4）。

4.7甲基红指示剂（C15H15N3O2）。

4.8溴甲酚绿指示剂（C21H14BrO5S）。

4.9氢氧化钠溶液（1mol/L）

称取40g（精确至0.01g）氢氧化钠用水溶解，定容至1000mL。

4.10硫酸钾浸提剂（0.5mol/L）

称取174.26g（精确至0.01g）硫酸钾，用研钵磨成粉末，倒于2.5L塑料桶中，加水2L，盖紧螺旋盖置于摇床（150r/min）至完全溶解。

4.11氢氧化钠溶液（400g/L）

称取400g（精确至0.01g）氢氧化钠加水溶解，定容至1L。

4.12硼酸溶液（20g/L）

称取20g（精确至0.01g）硼酸加水溶解，定容至1L。

4.13硫酸标准溶液（0.02mol/L）

准确移取5.56mL浓硫酸缓缓注入800mL水中，用水定容至1000mL，配制成浓度为0.1mol/L的硫酸标准溶液，按照GB/T601对其进行标定。将此溶液用水稀释5倍得到0.02mol/L的硫酸标准溶液。

4.14指示剂

称取0.1g（精确至0.0001g）甲基红和0.5g（精确至0.0001g）溴甲酚绿指示剂放入玛瑙研钵中，加入100mL95%乙醇研磨溶解。

5仪器设备

5.1电子天平：感量0.0001g和0.01g。

5.2真空泵。

5.3恒温培养箱（25℃±1℃)。

5.4凯氏定氮仪。

5.5摇床（25℃,150r/min，300r/min）。

6测量步骤

6.1土壤前处理

新鲜土壤应立即处理或保存于4℃冰箱中，测定前先仔细除去土壤中可见植物残体(如根、茎和叶)及土壤动物(如蚯蚓等)，过2mm孔径筛并混匀。如果土壤过湿，应在室内适当风干，并经常翻动，以避免局部干燥，至土壤含水量约为田间持水量的40%（以手感湿润疏松但不结块为宜）。如果土壤过于干燥，用蒸馏水调节含水量至田间持水量的40%。将土壌置于密封的塑料桶内，在25℃±1℃下预培养7-15d。桶内有适量水以保证相对湿度

为100%，并在桶内放一小烧杯1mol/LNaOH溶液以吸收土壌呼吸产生的CO2。这些过程是为了消除土壤水分限制对微生物的影响以及植物残体对测定的干扰。经预培养的土壤应立即分析，否则，应置于4℃下保存，且分析前需在上述条件下至少再培养24h。

6.2熏蒸

称取经前处理相当干50g（精确至0.01g）烘干基的新鲜土壤3份，置于100mL烧杯中。将烧杯放入真空干燥器中，同时放入盛有去乙醇氯仿（约2/3烧杯）的烧杯2~3个，烧杯内放入少量经浓盐酸溶液浸泡过夜后洗涤烘干的瓷片（0.5mm大小，防瀑沸），或放入抗瀑沸的颗粒，同时放入一小烧杯1mol/LNaOH溶液以吸收熏蒸期间释放出来的CO2，干燥器底部还应加入少量水以保持湿度，用真空泵抽真空，在-0.