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生乳及巴氏杀菌乳中嗜冷菌的测定快速培养法.docxVIP

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生乳及巴氏杀菌乳中嗜冷菌的测定快速培养法

1范围

本文件描述了生乳及巴氏杀菌乳中嗜冷菌测定的快速培养法。本文件适用于生乳及巴氏杀菌乳中嗜冷菌的快速测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本

文件。

GB4789.1GB/T6682

3术语和定义

食品安全国家标准食品微生物学检验总则分析实验室用水规格和试验方法

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样悬浮液与44℃-47℃的乳平板计数(MPC)琼脂于平板中混合,于21℃条件下培养25h,菌落计数,算出每mL(g)检样中的嗜冷菌数量。

5试剂或材料

除非另有规定,仅使用分析纯试剂。

5.1水:GB/T6682,一级。

5.2无菌磷酸盐缓冲液储备液:称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用约175mL的1mol/L

氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000mL后,4℃贮存。

2

5.3无菌磷酸盐缓冲液工作液:取磷酸盐缓冲液储备液(5.2)1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分

装于适宜容器中,121℃高压灭菌15min。

5.4无菌生理盐水:称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min。

5.5MPC琼脂:称取5.0g酪蛋白胨、2.5g酵母提取物、1.0g无水葡萄糖和1.0g不含抑制性物质的

脱脂奶粉溶于1000mL蒸馏水中,调节pH至7.0±0.1。加入9.0~18.0g琼脂1,煮沸溶解,分装于适宜容器,密封后,121℃高压灭菌15min。

6仪器设备

6.1恒温培养箱:温度为21℃±1℃。

6.2高压灭菌锅。

6.3培养皿:直径90mm。

6.4pH计:25℃时精度为±0.1。

6.5移液器:0.1mL和1mL,配无菌枪头。

6.6天平:精度为±0.1g。

6.7水浴锅。

6.8振荡器。

6.9均质器。

6.10菌落计数装置(可选):例如,由带黑暗背景的发光基座、装有辅助菌落数检测的放大镜和(可

选)机械或电子式数字计数器组成。

7样品

样品的采集按GB4789.1执行。

8检验程序

嗜冷菌的快速检验程序见图1。

1)基于琼脂的凝胶程度。

3

图1嗜冷菌快速检验程序

9试验步骤

9.1取25mL(g)样品置于盛有225mL无菌磷酸盐缓冲液(5.3)或无菌生理盐水(5.4)的无菌锥形

瓶或无菌均质袋中,混匀,制成1:10的样品匀液。

9.2用1mL移液器(6.5)吸取样品匀液(9.1)1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管

中(注意枪头尖端不应触及稀释液面),振荡混匀,制成1:100的样品匀液。

9.3按9.2操作,制备10倍系列稀释样品匀液。每次稀释均使用新的无菌枪头。

9.4选择适宜稀释度的样品匀液(至少2个连续稀释度),取1mL样品匀液于培养皿(6.3)内,每

个稀释度做两个培养皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个培养皿(6.3)内作空白对照。

4

9.5将12mL~15mL冷却至44℃~47℃的MPC琼脂(5.5)倾注培养皿,从初始悬浮液制备结束到将

培养基倒入培养皿(6.3)之间的时间不应超过45min。转动培养皿使样品匀液与培养基均匀混合,冷却。

9.6待琼脂凝固后,将培养皿(9.5)倒置,21℃±1℃培养25h±1h。

10菌落计数

10.1可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数装置(6.10),记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌

落计数以菌落形成单位(ColonyFormUnit,CFU)表示。

10.2选取菌落数在10CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于10CFU的

平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为“多不可计”。

10.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。其中平板有较

大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无较大片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的四分之一,而其余四分之三中菌落分布又很均匀,可通过推算,以代表一个平板的菌落数。

11试验数据处理结果计算

11.1若只有1

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