大肠菌群计数.pptVIP

胆盐可抑制革兰氏阳性菌。01煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。02乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。03发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。04煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）结果报告根据大肠菌群阳性管数,查MPN检索表，报告每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值。MPN检索表的应用MPN（最可能数）是表示样品中活菌密度的估测。因此MPN值只是活菌密度的估算值，并不是样品中活菌数的真值。1g(mL)检样中最大可能数（MPN）表1,00042240033424.5202021,00090290323423.61410243040210223381.49.200242037150123424.5160314201893023424.51512142040160313423.61102142037120213383.6111112001775113201.37.4011180943013383.6112011801764203181.37.21011108.738103180.173.6001944.623003383.69.4030948.736132181.26.2020948.729032181.26.1110948.735222110.153.0010948.7281229.60.153.0100424.5210229.5--3.0000高低0.0010.010.10高低0.0010.010.1095%置信区间MPN阳性管数95%置信区间MPN阳性管数这个MPN检索表是ISO、FDA、AOAC、USDA/FSIS、北欧等标准通用的。01表里的数字是有小数点的。02报告单位不同。现报告单位为g/ml，而原报告单位是100g/ml。03原标准MPN表有64个组合，而现标准MPN表只有40个组合。04使用MPN检索表的注意点当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时，如：阳性管数为122，123，232，233等时，建议增加稀释度(可做4~5个稀释度)，使样品的最高稀释度能达到获得阴性终点，然后再遵循相关的规则进行查找，最终确定MPN值。第二法平板计数法01平板计数法相对于MPN法来说，检验结果更精确。03所用培养基：VRBA琼脂、BGLB培养基。02适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是MPN法更有优势。适用范围与培养基平板计数法的检验程序检样25g(ml)+225ml稀释液，均质10倍系列稀释选择2~3个适宜稀释度的样液，接种VRBA平板计数典型和可疑菌落36℃±1℃18~24hBGLB肉汤证实试验36℃±1℃18~24h报告结果注：VRBA(结晶紫中性红胆盐琼脂)又称为：VRB或VRBL样品稀释同第一法。01选取适宜的2~3个连续稀释度,每个稀释度接种两个灭菌平皿,每皿1mL。另取1mL生理盐水做个空白对照。将冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)约15mL倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL~4mLVRBA覆盖平板表层。02操作要点选择菌落数在30~150之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。平板菌落数的选择月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，又叫十二脘基磺酸盐胰蛋白胨肉汤，英文缩写LST肉汤。LST肉汤是国际上通用的培养基。与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性，LST中的选择性抑菌剂是月桂基硫酸盐，相对于胆盐稳定性更好些。还有就是LST更容易观察。★★★大肠菌群计数01指一群在36℃条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。02该菌群主要来源于人畜粪便,作为粪便污染指标评价食品的卫生状况,推断食品中肠道致病