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法医物证鉴定线粒体DNA检验规范

1范围

本技术规范规定了法医学DNA实验室进行人类线粒体DNA检验的基本要求、检验程序、结果比对与解释、鉴定意见和鉴定文书。

本技术规范适用于法医学DNA实验室采用线粒体DNA遗传标记对母系亲缘关系如母子（女）、隔代外祖母/外孙（女）、舅甥关系、姨甥关系、同母的全同胞或半同胞进行亲缘关系鉴定。

本技术规范适用于法医学DNA实验室对降解严重的毛干、骨、牙等生物检材，在无法获取核基因组DNA或核基因组DNA量不足而无法完成检测时进行线粒体DNA检测，帮助个体身份信息的确认。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GA/T383-2014法庭科学DNA实验室检验规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

线粒体DNAmitochondrialDNA,mtDNA

人类唯一的细胞核外DNA，呈闭环双链结构，约16.5Kb；不遵循孟德尔遗传定律，表现为母系遗传，通过卵细胞将其中的遗传信息传递给后代；无有丝分裂和减数分裂的周期变化；遗传物质位于细胞器内，不受核移植的影响；单个细胞中mtDNA拷贝数多；存在异质性现象。

3.2

异质性heteroplasmy

当两种或两种以上的mtDNA序列存在于同一个细胞、组织或个体时称为异质性，可分为长度异质性和点异质性，常见于以下两种情况：（1）个体在同一组织检出不同的mtDNA序列；（2）个体在不同的组织检出不同的mtDNA序列。

3.3

高变区hypervariableregion,HVR

位于mtDNA非编码区的DNA区域，突变率可达到单拷贝核基因组的6-17倍，且无修复系统、不受选择压力的影响，积累了较多的变异，多态性好。

注：也称为控制区（controlregion），或者D-环区（D-loopregion），可分为高变区I（HVR-I）、高变区II（HVR-II）和高变区III（HVR-III）。

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3.4

安德森参考序列Andersonreferencesequence,ARS

安德森于1981年在英国剑桥Sanger实验室首次完成测定的人类线粒体DNA序列，GenBank登录号：M63933。

注1：也被称为剑桥参考序列（cambridgereferencesequence，CRS）。

注2：1999年，安德鲁斯等人对剑桥参考序列所用的样本进行了重新测序，修正了最初公布序列中的11个碱基序列。修订的剑桥参考序列（revisedcambridgereferencesequence，rCRS）是目前法庭科学公认的标准参考序列（GenBank登录号：NC_012920.1）。

4基本要求

4.1鉴定机构应具有从事法医物证的执业范围，且应满足如下要求：

a)定期参加能力验证相关计划并考核合格；

b)对所有影响鉴定结果的人员岗位规定相应的能力要求，包括教育、资质、培训、专业知识、技能等，并保留相关记录；制定适宜的培训计划并组织实施；

c)依据鉴定方法和要求对鉴定人以及参与鉴定工作的人员进行监督，以评价其鉴定工作的符合性和满意程度；监督的结果应作为培训需求评价的依据之一；

d)具有能识别样本的标识系统，并确保样本在鉴定过程期间能得到持续的识别；

e)建立样本的运输、接收、处置、保护、存储、保留和/或清理的规定，应对接收、内部传递、处置、保留、返还和清理等过程进行记录，确保记录的完整性和可追溯性。

4.2鉴定人应具有法医物证鉴定执业资格，熟悉并掌握线粒体DNA检验的方法和原理，并能正确评价结果。

4.3鉴定活动应包括检验（采样、DNA提取和纯化、DNA定量分析、mtDNA测序）、结果比对与解释、鉴定意见判断、鉴定文书撰写等环节。鉴定活动完毕后，应将各个环节的记录进行归档。

5检验程序

5.1采样要求

5.1.1毛根、毛干、指甲、陈旧骨骼、牙、核DNA检测失败的血痕、组织等生物检材均可考虑检测mtDNA。进行同一母系关系比对时，尽量采集同一种类型的生物检材。

5.1.2样本应分别包装，注明被鉴定人姓名、编号、采样日期等。

5.1.3样本采集后应冷藏或冷冻保存。

5.1.4采样单须在案件鉴定完毕后同其他原始技术记录一并存入档案。

5.2DNA提取和纯化

按照GA/T383-2014中附录A的方法执行。

5.3DNA定量分析

按照GA