实验室必备技能：免疫荧光组织细胞固定和破膜不得不说的故事.pdfVIP

吾日三省乎吾身。为人谋而不忠乎?与朋友交而不信乎?传不习乎?——《论语》

事

定和破膜至关重要。固定的目的在于将组织和细胞结构保存完好，终

止细胞内酶的活动及其他代谢活动，提供我们想研究的某个时间点的

真实情况。

而破膜则是为了开疆辟土搭鹊桥，喜送抗体见抗原。因为如果需

要检测的抗原在细胞内，抗体在细胞外飘啊飘，找不到机会与细胞内

的抗原手牵手一步两步把色染（如果要检测的抗原在细胞膜外表面或

细胞外基质，那么不用破膜。因为在不破膜的情况下，抗体也能和抗

原红尘作伴，活得潇潇洒洒，策马奔腾，共享染色之华）。

常用的固定剂和破膜剂中有很多英雄好汉，如下表。

甲醛，戊二醛，甲醇/丙酮

破膜剂TritonX-100,NP-40,Brij-58,皂苷,洋地黄皂苷,甲醇/丙酮

虽然他们都有一身好武艺，但在固定和破膜界各有所长。兵法曰：

知己知彼，方能百战不殆。要想获得好的固定和破膜效果，有哪些不

得不知道的知识点呢？请听小编娓娓道来！

固定剂界的翘楚

1

甲醛

几乎在每个实验室都有甲醛的传说，源于它作为固定剂的职业道

德操守极好。对于免疫荧光实验来说，在大多数情况下，甲醛是最好

的固定剂。它是一种相对较温和的固定剂，在常温下一小时，4%的甲

醛可穿透的距离约2毫米。小鼠脑组织用4%甲醛固定过夜，效果还不

错。而对于培养的细胞，用2-4%甲醛(用pH7.4的PBS配制)固定15

分钟即可(20摄氏度)。

另外，固定甲醛本身导致的背景信号对实验影响不大。相比戊二

醛来说，它不影响免疫表位的识别。由于买的瓶装甲醛很多含有甲醇，

相对而言，效果没有用多聚甲醛现配现用的甲醛好。因此，使用购买

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以获得更好的效果。

2

戊二醛

戊二醛，可以给组织细胞的细微结果提供最好的呵护，通常可用

于电镜和一些免疫荧光实验，比如微管定位。

但是，戊二醛也有矫情的一面，它常可导致免疫表位的改变，这

让抗体不得与抗原你侬我侬。有时候可导致一些非特异性荧光的出现。

2%的戊二醛在常温下，一个小时可穿透约700微米的组织。

有些实验室会将戊二醛和甲醛联合使用进行组织细胞固定，利用

的就是这两种固定剂各有所长。于是出现了下图的斗嘴日常。

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这对小冤家听说这样的互补关系可能很棒，于是在媒婆的鼓动下，

他们走进了婚姻的殿堂，从此夫妻双双把固定做。

3

甲醇/丙酮

冰甲醇或冰丙酮固定速度较甲醛和戊二醛快，也在固定界有所建

树。比如，他们可以用于细胞骨架成分的固定。不足之处在于他们在

固定的同时会改变一些抗原的位置。另外，由于他俩在固定的同时也

会破膜，有些细胞内的可溶性抗原就会在破膜处嗨起来，出去浪，这

样一来，如果你要检测的刚好是这些可溶性抗原，那么，结果就不好

说了。再者，由于固定同时会发生脱水，所以组织细胞可能会发生皱

缩，不再维持原本水灵灵的模样。

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在使用上述各种固定剂时，需要注意的是，固定时间与切片厚度

和固定剂的特点相关，不同固定剂所需固定时间和浓