5章凝集反应-Microsoft-PowerPoint-演示文稿.ppt

第五章凝集反应和沉淀反应第一节凝集反应凝集反应是1细菌、红细胞等颗粒性抗原，2表面包被可溶性抗原或抗体的颗粒性载体(致敏颗粒)与相应的抗体(抗原)特异性结合后，在电解质存在的条件下，出现肉眼可见的凝集现象。也可进行半定量。凝集反应分为两个阶段：1抗原抗体特异性结合阶段，反应快，不出现可见反应。2出现可见的凝集反应阶段，反应慢。第二节直接凝集反应和间接凝集反应一、直接凝集反应在适当电解质参与下，颗粒性抗原与相应抗体结合出现肉眼可见的凝集现象称为直接凝集反应,反应中的抗原称为凝集原参与反应的抗体称为凝集素。(一)玻片凝集试验抗原抗体在玻片上进行的反应，血型鉴定、细菌分型。(1)半定量试验-抗体效价测定。(2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体，只加抗原)。二、间接凝集反应将可溶性抗原(抗体)吸附在适当大小的(正常人O型红细胞或者胶乳颗粒)颗粒性载体表面，与相应的抗体(抗原)，在适宜的电解质存在的条件下出现特异性凝集现象称为间接凝集反应。1.正向间接凝集反应用可溶性抗原(已知)致敏载体检测未知抗体。2.反向间接凝集反应用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。3.间接凝集抑制反应将已知的抗体及已知抗原致敏的颗粒载体作为诊断试剂，检测标本中是否存在与致敏颗粒抗原相同的抗原。如妊免试验，检查尿中是否存在HCG。方法：尿液(HCG)与试剂Ⅰ(HCG抗体)混匀后再加试剂Ⅱ。间接凝集抑制反应要点：(1)两种试剂，抗体和吸附HCG的载体颗粒。(2)试剂加入的顺序：首先尿液+抗体(试剂Ⅰ)，混匀，反应后再加第二种试剂(吸附抗原的载体颗粒）。(3)结果判断：凝集者为阴性；无凝集者为阳性。(4)需要做阴性对照。临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。三、间接血凝试验间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结合。常用绵羊、家兔等红细胞。自身红细胞凝集试验样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。血清中无乙型肝炎表面抗原（HBsAg）第三节抗球蛋白参与的血凝试验抗球蛋白试验(antiglobulintest)由coombs建立，又称为库姆氏试验，用于检测不完全抗体。★不完全抗体的特点不完全抗体多半是IgG类抗体，分子量较小，体积小,可与相应抗体结合但不能起到桥连作用，一般条件下不出现可见反应。Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体起桥联作用，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，使红细胞凝集。※新生儿溶血症由于母子血型不合，母亲与胎儿之间产生抗原抗体反应，造成胎儿红细胞被破坏。母亲O型、胎儿A型或B型。当胎儿由父方遗传所得的血型抗原与母亲不同时，进入母体后即会刺激母体产生相应的抗体(不完全抗体)，当再次怀孕时，抗体可通过胎盘进入胎儿体内，与胎儿红细胞发生抗原抗体反应导致溶血。一、直接coombs试验用于检测吸附于红细胞表面的不完全抗体。将抗人球蛋白试剂加入到表面结合不完全抗体的受检者红细胞中，出现凝集。第四节沉淀反应的特点沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异结合而出现的沉淀现象。根据反应介质和检测方法不同分为：第五节液体内沉淀试验和凝胶内沉淀试验一、液体内沉淀试验(一)环状沉淀反应(ringprecipitation)又称环状试验。主要用于抗原的定性试验。用已知抗体来检测未知抗原。在小口径(内径2～3mm)试管中先加入已知抗血清，然后将待检抗原小心地加在抗血清的表面，成为界面清晰的两层。一定时间后，两界面交界处出现白色沉淀环，为阳性反应。(二)免疫浊度测定原理：可溶性抗原与相应抗体结合，两者比例合适和增浊剂的作用下，可快速形成一定大小的免疫复合物，使反应液出现浊度，浊度的大小与抗原抗体的量呈正比。1.免疫浊度测定的影响因素(1)抗原抗体的比例抗原抗体比例是形成浊度的关键因素。(2)抗体的质量二、凝胶内沉淀试验利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体相遇且比例适当的位置形成肉眼可见的沉淀线或沉淀环。(一)单向免疫扩散试验将抗体混于琼脂凝胶中，待测抗原在琼脂内由局部向四周自由扩散，在抗体抗原比例适当处形成沉淀环，沉淀环的直径或