甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的测定.docx

食品补充检验方法

BJS202205

甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的测定

2022-02-07发布

国家市场监督管理总局发布

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甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的测定

1范围

本方法规定了甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸高效液相色谱法的测定方法。

本方法适用于甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的测定。当样品中检出3-硝基丙酸时，可用高效液相色谱-串联质谱联用法进行确证。

2原理

用水提取甘蔗及甘蔗汁中的3-硝基丙酸，提取液调pH后经乙酸乙酯萃取，经反相高效液相色谱测

定，外标法定量。

3试剂和材料

注：除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。3.1试剂

3.1.1甲醇(CH3OH)：色谱纯。

3.1.2乙酸乙酯(CH3COOC2H5)。

3.1.3磷酸(H3PO4)。

3.1.4磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]。

3.1.5甲酸(HCOOH)：色谱纯。3.2试剂配制

3.2.1磷酸溶液(1+9)：量取10mL磷酸(3.1.3),加水90mL,混匀。

3.2.2磷酸氢二铵溶液(pH2.0)：称取磷酸氢二铵1.5g(3.1.4),用水溶解，加水稀释至1000mL,用磷酸溶液(3.2.1)调pH为2.0±0.1,混匀。

3.2.30.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸(3.1.5),加水稀释至1000mL,混匀。

3.2.4磷酸水溶液(pH2.0)：取100mL水，用磷酸溶液(3.2.1)调pH为2.0±0.1,混匀。

3.3标准品

3-硝基丙酸的名称、CAS号、分子式、相对分子质量、结构式见附录A中表A.1,纯度≥97%,或采

用国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.4标准溶液配制

3.4.1标准储备液(1mg/mL)：准确称取50mg（精确至0.1mg)标准品，置于50mL容量瓶中，加适量的水溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液。4℃避光保存，有效期

6个月。

3.4.2标准中间液(0.1mg/mL)：吸取标准储备液(3.4.1)10.0mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻

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度，摇匀，制成质量浓度为0.1mg/mL的标准中间液。4℃避光保存，有效期3个月。

3.4.3标准工作液：吸取标准中间液(3.4.2)2.0mL、3.0mL、5.0mL、10.0mL、20.0mL、40.0mL,置于100mL容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，得3-硝基丙酸标准溶液的最终质量浓度分别为2.0μg/mL、3.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL的标准系列工作溶液。各实验室可在实

际应用时根据情况调整标准系列工作溶液浓度。3.5材料

3.5.1微孔滤膜：0.45μm,有机相。

3.5.2微孔滤膜：0.22μm,有机相。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。4.2超声波水浴。

4.3高速离心机：转速≥10000r/min。

4.4涡漩混合器。4.5组织捣碎机。

4.6pH计：精确至0.1。

4.7电子天平：感量分别为0.001g和0.1mg。

4.8氮吹仪。

5分析步骤

5.1试样制备5.1.1甘蔗

取不少于20g的去皮甘蔗样品，将其切成若干段，再切成小于0.5cm的块后放入组织搅碎机中搅碎，混匀后置于洁净的容器中密封备用，备样于-20℃贮存。

样品应及时测定，临用现制。5.1.2甘蔗汁

充分混匀，直接取用；若不能及时测定，应于-20℃储存。

5.2试样前处理

称取试样2g（精确至0.001g)于50mL离心管中，加水10mL,超声提取10min,用磷酸溶液(3.2.1)调