基因工程和基因组学.pptVIP

DNA自动测序分析核酸序列是不是所需要的基因，或具有什么功能，同源性比较是常用的方法之一。另一种方法是分析核酸序列的阅读框架。0102(4)核酸序列分析。(二)聚合酶链式反应(PCR)扩增基因聚合酶链式反应(poly-merasechainreaction,PCR)是体外快速扩增DNA的方法。由美国的Mullis于1986年发明的方法，可在数h内使目的基因片段扩增到数百万个拷贝.PCR反应包括下述3个步骤。1·变性在94-95oc使模板DNA的双链变性成单链。2·复性两个引物分别与单链DNA互补复性，复性的温度为50-70oC3·延伸在引物的引导及Tap酶的作用下，于72oC记下合成模板DNA的互补链。PCR技术原理示意图靶序列变性和引物复性循环1循环2循环3变性和引物复性链延伸链延伸DNA以指数形式扩增(2n)，其中长片段以线性形式扩增(2n+2)，最终主产物片段长度在两个引物之间。预变性(92-95?C,2-5m)变性(92-95?C,30s)复性(40-60?C,30s)延伸

(72?C,30-60s)总延伸

(72?C,7m)(25-35)PCR的一般过程：经过30次的循环,扩增的DNA片段可达100万倍以上。24016256７11452228200短片段（单链）1412108642长片段（单链）128643216８４２总片段（单链）６５４３２１０循环数先化学合成多个含有8-100个核苷酸的寡聚核苷酸，每个寡聚核苷酸之间具有19-24个核苷酸的重叠序列,再将各个寡聚核苷酸等量(摩尔浓度)混合，在DNA聚合酶(或Tap酶)作用下，各寡聚核苷酸又作为引物合成新链，使单链部分补齐成为双链。再用两个PCR引物，经PCR扩增出DNA片段。若将两个DNA片段放在一起，经多级SOE-PCR扩增出完整的基因片段.1人工合成基因:2五、基因工程的应用(一)基因工程工业：如细菌中表达人的胰岛素，先人工合成成熟胰岛素原的A链和B链核苷酸(A链63bp，B链90bp),再分别与载体中的β-半乳糖苷酶序列连接，构成β-半乳糖苷酶-胰岛素原融合蛋白，受β-半乳糖苷酶启动子控制。将构建的重组质粒转化大肠杆菌细胞，分别表达β-半乳糖苷酶与A链或B链的融合蛋白。从细菌中纯化的融合蛋白用溴化氰处理裂解，将β-半乳糖苷酶与A链或B链分开，得到纯胰岛素原蛋白。再将纯化的A链和B链混合后，经二硫键连接成为完整的胰岛素。胰岛素原的人工合成胰脏(A)n胰岛素原mRNAcDNA重组质粒转化细菌mRNA反转录酶胰岛素原基因与质粒连接感染E.coli胰岛素原(二)植物基因工程植物基因工程：植物基因转化是指将外源基因转移到植物细胞内，并整合到植物基因组中稳定遗传和表达的过程。

1，根瘤土壤杆菌转化技术:将目的基因与花椰菜病毒35S启动子及终止子组成嵌合DNA分子，插入到Ti衍生质粒的RB与LB内构成重组质粒，再转化到根瘤土壤杆菌细胞，将得到的重组根瘤土壤杆菌去感染植物细胞，从而使质粒的部分DNA与目的基因一起整合到植物染色体上，实现遗传转化。

2·基因枪转化技术:通过高压气体等动力，高速发射包裹有重组DNA的金属颗粒，将目的基因直接导人受体细胞，并整合到染色体上的方法。主要在抗病虫害、抗逆性、提高品质等方面的转基因作物。至1998年4月，世界各国批准进行的大田实验已达4387项。(三)转基因动物:转基因动物:将目的基因与载体构建成重组DNA后，用微量注射法将重组DNA导人受体合子细胞核中，实现遗传转化。例如，利用转基因羊大量表达人类的抗胰蛋白酶。畜牧业：培养出了包括猪、牛、羊、马、鸡、鱼等多种动物的转基因动物，涉及的基因有生长激素基因、抗冻基因、抗病毒基因等。生产贵重药物——乳腺生物反应器，如：红细胞生成素（肿瘤化疗的辅助药物）、乳铁蛋白（促进铁的吸收）、1-抗胰蛋白酶（治疗囊性纤维化及肺气肿）、凝血因子VIII及IX（治疗血友病）人血清白蛋白（治疗烧伤）、等。预测到2005年，年产值可达350亿美圆。01025-溴-4氯-3-吲哚-?-D-半乳糖苷（X-gal）01?-半乳糖苷酶02蓝色物质蓝白斑