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第五单元微生物分离纯化及鉴定技术模块一微生物纯培养的分离方法微生物纯种分离纯培养（pureculture）将多种混杂微生物，经某种技术或方法分离成纯种的过程将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。微生物纯种分离的原理和方法微生物样品多种混杂某种方法纯种（纯培养）分散成单个微生物平板培养单菌落每个菌落为纯种（纯培养）单菌落转接培养单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，称为菌落。菌落一个菌落是一个纯种，也是一个纯培养；单个微生物只在固体培养基上形成菌落；在液体培养基中不会形成菌落同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落一、划线法分区划线法（蛇形线法）操作图添加标题第三区划线添加标题添加标题第二区划线第一区划线添加标题适用于浓度较大的样品分区划线法适用范围：连续划线法操作图连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品0102二、稀释平板法从土壤中分离纯微生物104/ml单击此处添加正文。103/ml单击此处添加正文。102/ml单击此处添加正文。101/ml1、稀释倾注分离法2、稀释涂布分离法涂布平板法稀释倒平板法采用显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养，称为单细胞（单孢子）分离法。营养琼脂平板上不能形成菌落个体较小的微生物需采用显微操作仪分离难度与细胞或个体的大小成反比三、单细胞挑取法较大的微生物可使用毛细管提取五、小滴分离法Eachcolonywasexaminedmicroscopically选择培养基分离法1创造适于目的微生物生长条件2原理3促使目的微生物快速生长呈优势菌4抑制非目的微生物生长5从混杂微生物中分离目的微生物6利用选择培养基进行直接分离选择培养基只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基土壤目的菌优势非目的菌选择培养基直接分离单细胞选择培养基平板（含牛奶或酪蛋白唯一C、N源）37℃培养目的菌落菌落周围有透明蛋白水解圈1、利用选择培养基进行直接分离例一：分离筛选蛋白酶产生细菌营养选择因子：牛奶或酪蛋白只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶例一：分离筛选蛋白酶产生细菌含牛奶选择培养基目的菌生长平板
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