红橙土壤中拮抗放线菌的筛选与鉴定.pdf

摘要

放线菌在自然界中分布广泛，是一类能产生丰富活性物质的微生物类群，有三分

之二的天然活性物质来自于放线菌的代谢产物，其是天然抗菌活性物质的主要来源，

约70%的抗生素来自于放线菌。

本文对来自广东省廉江市三个不同红橙种植基地的红橙土壤中分离纯化的707株

放线菌进行了抗菌活性筛选，以大肠埃希氏菌（EscherichiacoliATCC）、金黄色葡萄

球菌（Staphylococcusaureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）3种质控菌株为靶

标菌，采用平板对峙法进行拮抗放线菌活性筛选，筛选获得5株对3种质控菌抑制作

用较强的菌株，分别为菌株MSZS3、菌株MSZS6、菌株GAL56、菌株YM24以及菌

株YM31。通过形态观察、分子生物学技术对活性菌株进行鉴定，主要研究结果如下：

（1）采用平板对峙法对放线菌进行抑菌活性筛选，在来自于九洲岛红橙园土壤

中的248株放线菌中，筛选出123株放线菌至少对1株靶标菌有抑菌活性，阳性率为

49.6%；最终筛选出菌株MSZS3和菌株MSZS6对3种靶标菌均有抑菌活性。在来自

于江秋红橙园土壤中的227株放线菌中，筛选出88株放线菌至少对1株靶标菌有抑

菌活性，阳性率为38.3%；最终筛选出菌株YM24和菌株GAL56对3种靶标菌皆有

抑菌活性。在来自于红江红橙园土壤中的232株放线菌中，筛选出55株放线菌至少

对1株靶标菌有抑菌活性，阳性率为23.7%；最终筛选出菌株YM31对3种靶标菌均

有抑菌活性。

（2）在8种形态学鉴定培养基中培养，确定菌株MSZS3和菌株MSZS6环境适

应能力较强，在各培养基中生长状况良好，但在MS培养基中的生长状态最为理想，

孢子产生速度最快。通过显微镜观察，菌株MSZS3的菌落小而密，菌株MSZS6的菌

落大而圆。两株菌的显微结构相似，孢子链为典型的螺旋状，孢子皆为半月型。以

MS培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、链霉菌1号培养基、改良高氏二号培养基为

形态学鉴定培养基，表明菌株GAL56和菌株YM24最适生长培养基皆为MS培养基。

在显微镜下观察，菌株GAL56和菌株YM24孢子丝都为螺旋形，孢子则为椭圆形；

菌株YM31在燕麦片琼脂培养基上生长状态最好，生长速度快且孢子丰富，孢子链为

螺旋形，孢子则为圆形。

（3）经16SrRNA分子鉴定和系统发育分析，菌株MSZS3初步判定为稀疏链霉

菌（Streptomycessparsus），菌株MSZS6初步判定为罗中链霉菌（Streptomyces

I

luozhongensis），菌株GAL56初步判定为淡紫褐链霉菌（Streptomycesenissocaesilis），

菌株YM24初步判定为查塔努加链霉菌（Streptomyceschattanoogensis），菌株YM31

初步判定为尼氏链霉菌（Streptomycesniveiscabiei）。

关键词：放线菌；抑菌活性；形态学鉴定；16SrRNA；红橙土壤

II

目录

1引言1

1.1研究背景及意义1

1.2放线菌来源1

1.2.1土壤放线菌1

1.2.2海洋生物相关放线菌2

1.2.3植物内生放线菌3

1.3放线菌的应用现状3

1.3.1在食品中的应用4

1.3.2在农业中的应用5

1.3.3在医疗中的应用5

1.3.4在其他领域中的应用6

1.4食品中常见的致病菌和腐败菌7

1.4.1大肠杆菌7

1.4.2金黄色葡萄球菌7

1.4.3枯草芽孢杆菌8

1.5研究内容及目的意义8

1.6技术路线9

2材料与方法10

2.1实验材料10

2.1.1放线菌10

2.1.2靶标菌株10

2.1.3主要试剂10

2.2实验仪器及设备10

2.3实验方法12

2.3.1活性放线菌筛选12

2.3.2形态培养特征鉴定13

2.3.3分子生物学鉴定13

3结果与分析15