NLRX1在塞内卡病毒感染中的作用.pdf

摘要

近年来，A型塞内卡病毒（SenecavirusA,SVA）作为一种新兴的可以引起猪的原

发性水疱病的病毒在我国广泛传播，其发病特征与世界动物卫生组织（World

OrganizationforAnimalHealth，OIE）规定A类传染病口蹄疫极其相似，严重危害我

国养猪事业的健康发展。核苷酸结合寡聚结构域样受体家族成员X1（NOD-likereceptor

familymemberX1，NLRX1）是NLR家族中的一员，在先天免疫中发挥着重要作用。

目前NLRX1在SVA感染中起到什么作用并未有人研究，本论文就NLRX1在SVA感

染HEK293T细胞过程中起到的作用以及NLRX1对SVA复制的影响进行了初步的研

究，研究内容和结果如下：

本研究使用感染复数MOI=1的SVA感染HEK293T细胞，应用实时荧光定量PCR

（qPCR）和蛋白免疫印迹实验（WesternBlot）检测NLRX1的表达，发现SVA感染

可以引起NLRX1在mRNA水平和蛋白水平的显著增加。

本研究构建了NLRX1真核表达质粒，通过qPCR和WesternBlot检测了NLRX1

真核表达质粒的有效性，qPCR结果显示NLRX1的mRNA水平提高20000多倍，

WesternBlot结果显示在136KDa处检测到融合蛋白，表明NLRX1真核表达质粒构建

成功。本研究又针对NLRX1基因的CDS区设计一条小干扰RNA（siRNA）序列，使

用WesternBlot检测NLRX1的干扰效率，结果显示NLRX1的蛋白表达水平显著下

降，可以降低NLRX140%以上的表达量，表明NLRX1小干扰RNA构建成功。

为探究NLRX1基因在SVA感染中的作用，本研究使用MOI=1的SVA分别感染

NLRX1过表达以及干扰表达的HEK293T细胞模型，并使用qPCR检测了SVA病毒

的复制量以及细胞内炎性相关因子（IL-6、IL-18、TNF-α和NLRP3）、I型干扰素（IFN-

α和IFN-β）、干扰素刺激基因（PKR和IFIT2）和干扰素上游因子（RIG-I、MAVS、

TBK1、IRF3、IKK和TRAF）的表达量。qPCR结果显示过表达NLRX1能够抑制病

毒的复制，并且在SVA感染后期显著提高IL-6、NLRP3、IFN-α、IFN-β的表达，对

IL-18、TBK1和IRF3影响较小；干扰NLRX1的表达同样能够抑制病毒的复制，并在

SVA感染后期显著提高IL-6、IL-18、TNF-α、NLRP3、IFN-α、IFN-β、IRF3和TBK1

的表达。此外NLRX1过表达和干扰表达的结果一致显示NLRX1能够抑制RIG-I、

MAVS、TNF-α、PKR、IKK和TRAF3的表达。

I

综上所述，本研究从正反两个方面探究了NLRX1在SVA感染过程中起到的调控

作用，为进一步研究NLRX1在SVA感染过程的作用机制提供了基础数据，也为开发

抗SVA的药物提供了一个新的思路。

关键词：塞内卡病毒；NLRX1；过表达；干扰

II

英文缩略词

英文缩写英文全称中文全称

SVASenecavirusAA型塞内卡病毒

NLRX1NOD-likereceptorfamilymemberX1核苷酸结合寡聚结构域

样受体家族成员X1

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