海洋杂色曲霉胞外多糖的结构表征及生物活性研究.pdf

摘要

多糖是生物体内一种具有广泛活性的大分子物质，具有安全、低毒的特点。我国

拥有丰富的海洋微生物资源，对海洋微生物资源进行综合性开发利用，有着广阔的前

景。本论文通过批量发酵海洋杂色曲霉、分离纯化得到一种新型组分多糖AVP141-A，

并对该组分多糖的化学结构、抗氧化活性、抗癌活性、抗菌活性、免疫活性及免疫活

性的作用机制进行研究，得出以下结果：

（1）海洋杂色曲霉粗多糖AVP141产率约为0.4g/L。采用离子交换和凝胶层析

法分离粗多糖，得到均一组分多糖AVP141-A。

（2）对AVP141-A的基本成分进行测定，结果表明AVP141-A的总糖含量为

81.72±3.34%，硫酸基含量为3.62±0.26%，未检测到蛋白质。AVP141-A是分子量（Mw）

为5135Da的葡聚糖，甲基化和NMR结果分析可推测AVP141-A可能由末端基团

[α-D-Glcp-(1→]，以及[→4)-α-D-Glcp-(1→]，[→6)-α-D-Glcp-(1→]，

[→4,6)-α-D-Glcp-(1→]组成，在[→4,6)-α-D-Glcp-(1→]的C-4位置可能有末端基团和硫

酸基的取代。

（3）利用ATP法评价AVP141-A对A549、Hep-G2、HT-29、MCF-7癌细胞系

细胞活力的影响，AVP141-A对A549细胞具有抑制生长作用，IC为1.877mg/mL，

50

0.007-7.000mg/mL范围内AVP141-A能促进MCF-7细胞生长；利用纸片法评价

AVP141-A抗菌活性，AVP141-A对海洋诺卡氏菌有微弱抗菌效果；利用1,1-二苯基-2-

三硝基苯肼（DPPH）和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）评价AVP141-A

体外抗氧化能力，在0-9mg/mL浓度范围内ABTS自由基清除率呈剂量依赖性，在最

高浓度9mg/mL时的AVP141-A清除率不到30%，DPPH自由基清除试验显示

AVP141-A无明显抗氧化活性；CCK-8法测定结果表明在25-200μg/mL浓度范围内，

AVP141-A可促进巨噬细胞RAW264.7的增殖，证明其对细胞无毒性。不同浓度（50、

100和200μg/mL）的AVP141-A能剂量依赖性地促进NO、TNF-α和IL-6分泌。免疫

荧光表明AVP141-A能剂量依赖性地促进RAW264.7细胞表达COX2，流式细胞术及

细胞荧光探针表明AVP141-A能升高细胞的脂质过氧化水平，蛋白质免疫印迹实验中

COX2、ACSL4的表达上调。

（4）借助代谢组学分析AVP141-A作用后细胞的差异代谢物的变化，利用网络

药理学分析AVP141-A可能作用靶点，联合分析海洋来源杂色曲霉胞外多糖

AVP141-A在免疫调节方面可能的作用机制，注释到45个显著差异代谢物，其中17

I

个上调，28个下调，有14个为氨基酸类。对p0.05，FDR0.05，impact0.1的网络

药理学和代谢组学富集通路进行联合分析，富集的KEGG通路有精氨酸生物合成、精

氨酸和脯氨酸代谢和雷帕霉素（mTOR）信号通路，这些通路均与氨基酸代谢密切相

关，并且这三条通路均富集到L-精氨酸，推测AVP141-A是通过影响RAW264.7巨噬

细胞的氨基酸代谢，尤其是精氨酸合成和代谢发挥免疫调节作用。

关键词：海洋微生物；多糖；结构；杂色曲霉

II

英文缩略词

缩写英文中文

AVPAspergillusversicolorpolysaccharide杂色曲霉多糖

BCABicinchoninicAcid二喹啉甲酸

BSABovineSerumAlbumin