miR-124-3p通过靶向CTGF对人肝癌细胞HepG2和Hep3B的调控作用.pdf

摘要

miRNA是一类大小约为22个核苷酸的内源性非编码单链RNA分子，且多数miRNA

在各种癌细胞中表达失调。miRNA广泛参与转录后的基因表达调控，通常与下游靶基

因结合，调节细胞周期、凋亡、迁移，以及侵袭等过程，从而调控肿瘤的发生与发展。

结缔组织生长因子（CTGF）是一种富含半胱氨酸的细胞外基质蛋白，相对分子量为38KD，

在人体内参与调控多种细胞功能以及复杂的生理活动。此前，本实验室通过基因芯片检

测发现CTGF与肝细胞增殖存在密切联系，因此推测其对肝癌细胞增殖存在调控作用。

利用TargetScan、miRBase、miRDB等生物信息学软件预测发现，miR-124-3p与CTGF

之间可能存在靶向关系。现有研究表明，miR-124-3p在乳腺癌、膀胱癌、胃癌、胶质母

细胞瘤以及白血病等疾病中存在表达失调并且发挥不同的功能，但关于miR-124-3p在

肝癌中的调控机制却鲜有报道。为了证实miR-124-3p靶向CTGF调控肝癌细胞的作用

机制，本文以HepG2和Hep3B细胞为实验材料，在体外水平研究了miR-124-3p与CTGF

的靶向关系、二者在肝癌细胞中如何发挥作用等问题。

为了探究相关miRNA在肝癌细胞中的表达情况，本文首先用qRT-PCR法检测了

miR-124-3p在人正常肝细胞HL-7702以及人肝癌细胞HepG2和Hep3B中的相对表达量，

发现miR-124-3p在两种肝癌细胞中的表达水平低于正常肝细胞，可由此推测miR-124-3p

在肝癌细胞调控中发挥潜在作用。然后对细胞转染模拟物（mimic）改变肝癌细胞中

miR-124-3p的表达量，在HepG2和Hep3B细胞中建立过表达体系。利用MTT法、CCK-8

法、EdU细胞增殖检测、Transwell小室法等实验技术来检测细胞活力、细胞增殖，以及

细胞迁移和侵袭能力的变化，流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。结果表明，

miR-124-3p表达上调后显著降低了两种肝癌细胞的细胞活力，抑制了细胞增殖、细胞迁

移以及侵袭能力；并且使G1期细胞占比提高，S期和G2/M期细胞占比降低，抑制细

胞周期进程，加速细胞凋亡。利用qRT-PCR和WesternBlot检测CTGF所涉及的一些信

号通路中相关分子表达的改变，以及EMT相关指标的变化。miR-124-3p过表达后对相

关通路蛋白的检测结果也与上述结果一致，且EMT相关蛋白表达变化显示miR-124-3p

过表达抑制了肝癌细胞的EMT过程。

接下来本文验证了CTGF基因在两种肝癌细胞中的表达显著高于正常肝癌细胞，并

I

继续通过qRT-PCR和WesternBlot检测miR-124-3p过表达体系中CTGF表达水平的变

化，结果显示过表达的miR-124-3p显著抑制了CTGF的表达水平。本文通过构建CTGF

重组过表达质粒，将mimic和过表达质粒同时共转染进入HepG2和Hep3B细胞，目的

是抵消miR-124-3p过表达引发的CTGF表达下调和相关指标的改变。对共转染后的

HepG2和Hep3B细胞采用Westernblot和qRT-PCR评估转染的效果，结果表明共转染

组中CTGF表达量重新上调。然后我们利用相关实验及方法，检测相关指标的恢复情况。

结果都证明了miR-124-3p通过靶向CTGF对肝癌细胞HepG2和Hep3B的调控作用。

综合以上结果，本研究证明了miR-124-3p通过靶向CTGF在肝癌细胞中发挥促凋

亡、抑制增殖和EMT进程的作用，这些结果可能为探究肝癌细胞的调控机制以及肝癌

的临床治疗提供一个新的思路。

关键词：miR-124-3p，CTGF，肝癌，细胞凋亡，EMT

II

ABSTRACT

miRNAsareaclassofendogenousnon-codingsingle-strandedRNAmoleculesofapproximately

22nucleotidesinsize,andmostmiRNAsaredysregulatedinexp