细胞移植示踪技术.ppt

细胞移植示踪技术

细胞移植替代疗法是现代医学中发展最为迅速的领域之一

利用荧光染料标记细胞改变细胞基因，使其表达特异性的标志物选用雄性供体和雌性宿主，利用Y染色体作为标记物用胸腺嘧啶类似物来标记分裂细胞采用超顺磁氧化铁作为磁共振对比剂活体示踪移植细胞移植细胞的示踪方法

010203荧光染料标记示踪技术是利用荧光染料标记细胞，通过荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等仪器检测，达到定位、示踪和定量等目的荧光色素主要有烟酸己可碱。3’-四甲基-吲哚-羧花青-高氯酸盐、二脒基苯基吲哚等不足之处：随着荧光衰减和细胞分裂而标记强度下降，不适宜检测1~2个月以上的细胞，需离体状态下进行病理学切片分析荧光染料标记示踪技术

绿色荧光蛋白、荧光素酶、碱性磷酸酶、新霉素磷酸转移酶等。将目的基因导人标记细胞内并维持其生物学功能。使其表达特异性的标志物,荧光分子来作为生物体的标记。改变细胞基因，使其表达特异性的标志物

最大优点标记技术简单，而标记效率很高，利用FISH技术细胞进行观察.01Y染色体标记的局限性是只能在雄性供体和雌性宿主之间标记，不能进行自体细胞的标记示踪研究02利用Y染色体作为标记物

用胸腺嘧啶类似物来标记分裂细胞利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷、氚胸腺嘧啶核苷能竞争竞争性地参与细胞DNA合成，从而达到标记分裂细胞的目的。标记物具有放射性，易造成放射污染0102

目前较理想磁共振示踪剂是超顺磁性氧化铁磁共振示踪突出的优势在于极佳的空间分辨力，能利用磁共振延迟增强扫描明确部位，实时显像并能连续跟踪标记的细胞，同时能提供有关信息问题:灵敏度相对不足安全性有待进一步研究(影响分化能力）非特异性显像（铁质代谢）磁共振示踪

随着细胞标记示踪技术的发展，可以在体外将细胞进行特异性标记，根据特异性标记可以追踪到细胞，从而对细胞在体内的迁移、增殖、分化和转归进行研究选择一个合适的标记方法是能够成功追踪到种子细胞并对其研究的基础。

理想的活体细胞示踪剂应具备以下几个特征：安全性：不影响细胞存活、生长、分化及其他生物学作用；不影响细胞基因组成；有其清除途径灵敏度：能准确反映少量标记细胞的行为（包括位置、移行）和标记细胞的数量等。特异性：能反映标记细胞外移、死亡或被巨噬细胞吞噬等情况，间质对标记细胞或标记物的非特异性处置不应对靶细胞数量和生物学活动造成错误判断。长久性：示踪时间较长，标记物不会自动衰减或随细胞分裂而稀释，可用非侵入性方法反复探测示踪。空间分辨力：能对标记细胞进行清晰的解剖学空间定位。