植物基因克隆方法.pptVIP

********************************第29页,共44页，星期六，2024年，5月第30页,共44页，星期六，2024年，5月1、差异杂交筛选（differentialhybridizationscreening）2、mRNA差异显示(differentialdisplay)3、DNA表达文库（expressionlibrary）4、DNA结合蛋白基因的分离5、信号传递蛋白基因的分离6、图位克隆技术（Map-basedcloning）第31页,共44页，星期六，2024年，5月酵母双杂交体系酵母双杂交体系(yeast-twohybridsystem,Y2H)是上一世纪九十年代初期在转录因子结构基础上发展起来的一种敏感的检测蛋白质-蛋白质相互作用的方法，亦即是体内鉴定基因的方法。它不仅可有效地用来分离能与一种已知的靶蛋白(targetprotein)相互作用的另一种蛋白质及其编码基因，而且可以用来确定蛋白质相互作用的特异性结构域及其氨基酸序列。第32页,共44页，星期六，2024年，5月方法构建两种E.coli-Yeast穿梭质粒载体:已知基因与BD序列融合表达融合的蛋白质叫做诱饵蛋白质(Baitprotein)