3.2基因工程的基本操作程序课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptxVIP

3.2基因工程的基本操作程序

培育转基因抗虫棉的四个步骤：与载体拼接普通棉花（无抗虫特性）棉花细胞抗虫棉

（有抗虫特性）导入抗虫基因重组DNA分子1.目的基因的筛选与获取2.基因表达载体的构建3.将目的基因导入受体细胞4.目的基因的检测与鉴定

受体细胞类型植物细胞动物细胞微生物细胞农杆菌转化法花粉管通道法我国科学家独创常用显微注射法Ca2+处理法

三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）1.目的基因导入植物细胞⑴花粉管通道法①操作方式：Ⅰ.用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中含目的基因的DNA溶液

三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）1.目的基因导入植物细胞⑴花粉管通道法①操作方式：Ⅱ.在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。

1.目的基因导入植物细胞⑴花粉管通道法②原理：利用植物授粉后形成的天然花粉管通道，将外源基因携带进入胚囊，此时的受精卵未形成细胞壁，且正在进行活跃的DNA复制，容易将外源DNA片段整合到受体基因组中。③优点：操作简单、技术成本低，免去了组织培养及诱导再生植株的全套人工培养过程。三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）

转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。实质是基因重组。农杆菌：是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。农杆菌挑食

三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）1.目的基因导入植物细胞⑵农杆菌转化法①原理：农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞、并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。双子叶、裸子植物受损伤口分泌酚类物质和糖类物质吸引农杆菌向受伤组织集中将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞中，并且将其整合到该细胞染色体DNA上激活Vir区基因，导致T-DNA加工和转移

三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）1.目的基因导入植物细胞⑵农杆菌转化法②过程：构建表达载体导入目的基因插入植物细胞染色体DNA上表达新性状转入农杆菌Ti质粒目的基因植物细胞

拓展延伸构建表达载体导入目的基因插入植物细胞染色体DNA上表达新性状转入农杆菌Ti质粒目的基因植物细胞⑴两次拼接第一次：目的基因拼接到Ti质粒的T-DNA上第二次（非人工操作）：被插入目的基因的T-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上⑵两次导入第一次：将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌（Ca2＋处理法）第二次（非人工操作）：含目的基因的T-DNA导入受体细胞

三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）1.目的基因导入植物细胞⑵农杆菌转化法③受体细胞：体细胞或受精卵④具体转化方法：a.可以将从新鲜的叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株。b.可以将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。

三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）2.目的基因导入动物细胞⑴方法：显微注射法⑵受体细胞：受精卵⑶过程：构建基因表达载体并提纯利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中早期胚胎培养胚胎移植获得具有新性状的动物Q：为什么选受精卵作为受体细胞？①体积大，易操作②易表现出全能性

3.目的基因导入微生物细胞⑴方法：Ca2+处理法⑵受体细胞：原核细胞（常选择大肠杆菌）三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）Ca2+的作用：增加细胞壁的通透性，可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（感受态细胞）。优点：繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少，易于培养。Ca2+感受态细胞吸收

3.目的基因导入微生物细胞⑶实例：利用转基因大肠杆菌生产药物三、第三步：将目的基因导入受体细胞（P80）Q：为何导入的不是胰岛素基因而是cDNA？大肠杆菌生产出的胰岛素具有生物活性？①原核生物细胞里没有相应的酶来去除内含子②原核生物没有真核的蛋白质加工系统（如内质网、高尔基体等）ps：在生产需要加工和分泌的蛋白质时，酵母菌比大肠杆菌更有优势。

拓展延伸1.原核基因的结构和表达翻译转录mRNA蛋白质

拓展延伸加工转录mRNA前体成熟mRNA外显子内含子翻译蛋白质2.真核基因的结构和表达外显子：能够编码蛋白质的序列内含子：不能够编码蛋白质的序列

受体细胞植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法受体细胞转化过程以农杆菌转化法为例：将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上↓转入农杆菌中↓导入植物细胞↓整合到受体细胞的DNA上提纯含