病毒抗原与抗体检测技术.ppt

二、酶联免疫吸附试验Enzyme-linkedimmunosorbentassayELISA酶标记抗体（抗原）与待测抗原（抗体）发生特异性反应，加入酶底物，通过酶对底物的显色反应，对待测抗原（抗体）进行定位、定性或定量分析。第31页，共79页，星期日，2025年，2月5日第32页，共79页，星期日，2025年，2月5日间接法检测抗体+++固相抗原标本酶标抗体底物显色第33页，共79页，星期日，2025年，2月5日双抗体夹心法检测抗原+++固相抗体标本酶标抗体底物显色第34页，共79页，星期日，2025年，2月5日竞争法可检测抗原、抗体YYY+YYY+YYY参考管酶标抗原YYY+YYY+YYY待测管酶标抗原抗原第35页，共79页，星期日，2025年，2月5日捕获法检测IgM抗体+++抗IgM标本抗原酶标抗体显色（含IgM）+第36页，共79页，星期日，2025年，2月5日三、免疫酶染色试验ImmunoenzymaticstainingtestIEST酶标抗体（抗原）—抗原（抗体）复合物底物有色底物第37页，共79页，星期日，2025年，2月5日三、免疫酶染色试验细胞免疫酶染色均相酶免疫测定——无需分离游离与结合的酶标记物酶标记物结合后改变酶活性非均相酶免疫测定—需分离游离与结合的酶标记物液相：用二抗或沉淀去除游离酶标记物固相：ELISA第38页，共79页，星期日，2025年，2月5日第三节放射免疫技术RadioimmunoassayRIA利用放射性核素灵敏精确性与抗原抗体反应特异性相结合进行定量分析放射免疫核素标记抗原与未标记抗原竞争性结合特异性抗体免疫放射核素标记抗体结合待测抗原R.S.Yalow第39页，共79页，星期日，2025年，2月5日第三节放射免疫技术125I、131I、3H、14C标记纯化鉴定放射性免疫活性第40页，共79页，星期日，2025年，2月5日第三节放射免疫技术第41页，共79页，星期日，2025年，2月5日第三节放射免疫技术放射免疫竞争法第42页，共79页，星期日，2025年，2月5日++++++++BoundFreeAgAb6/8=0.754/8=0.52/8=0.251/8=0.125B/B+F第43页，共79页，星期日，2025年，2月5日第三节放射免疫技术放射免疫以未结合的Ag*为F，Ag*Ab复合物为B，则B/F或B/(B＋F)与Ag的量变存在着函数关系－剂量反应曲线第44页，共79页，星期日，2025年，2月5日第四节血清学试验中和试验血凝/血凝抑制试验补体结合试验第45页，共79页，星期日，2025年，2月5日一、中和试验neutralizationtest体外将病毒与特异性抗体混合并发生反应，再将混合物接种至敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的方法。中和抗体第46页，共79页，星期日，2025年，2月5日一、中和试验（一）原理中和抗体存在使病毒不能吸附和穿入宿主细胞，使病毒失去感染力。当病毒与抗体混合后，接种敏感宿主细胞再观察敏感宿主的情况，即观察残存的病毒对宿主的感染力。第47页，共79页，星期日，2025年，2月5日一、中和试验（二）方法步骤病毒---已知滴度，并有感染力测滴度：细胞培养，将病毒10倍稀释接种敏感细胞或动物，观察CPE或动物感染情况，确定滴定终点以CCID50或LD50表示标准病毒试验浓度：100CCID50/单位体积或100LD50/单位体积第48页，共79页，星期日，2025年，2月5日一、中和试验抗体用细胞培养法测病毒抗体的滴度：将倍比稀释的病毒抗血清液与等量的标准病毒液混合，接种敏感细胞，观察CPE。病毒抗体滴度的确定：抗血清保护细胞免受病毒感染的最高稀释倍数的倒数。抗体滴度的含义：抑制CPE的最高稀释