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中文摘要

股骨头坏死血浆长非编RNA早期分子预警标志物的识别

背景：

股骨头坏死（osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH）是一种由遗传易感因

素和环境因素联合引起的复杂性疾病，引起骨组织和骨髓成分部分坏死，最终导

致髋关节破坏性改变。据统计，2015年我国非创伤性ONFH患者累计812万例，

提示其已对我国公共卫生健康构成重大威胁。ONFH的早期诊断和治疗可以延缓

病情进展，降低股骨头塌陷风险。因此，早期诊断是降低ONFH发病率、延缓病

情恶化和推迟手术时机的关键。由于ONFH发病隐匿，在出现临床症状时大多

已进入疾病的中晚期，且对ONFH诊断有高特异性和敏感性的磁共振成像在临

床应用中有一定局限性。因此，迫切需要研发ONFH早期诊断技术和方法。

近年来，ONFH的分子发病机制有了长足的进展，尤其免疫分子发病机理的

研究显示从骨代谢显现分子紊乱到ONFH发病可能经历漫长时间。在此期间，

长非编RNA（longnon-codingRNA，lncRNA）作为基因组范围基因表达的总调

节器，应该在ONFH分子损伤网络形成之前便发生紊乱。在ONFH患者出现临

床症状前的漫长时间里，lncRNA受到遗传因素与环境因素的影响始动紊乱，引

发miRNA表达及功能异常，进而导致特定的mRNA异常，形成lncRNA-miRNA-

mRNA分子损伤网络，驱动并维持ONFH分子损伤恶性循环。因此，识别血浆

lncRNA在ONFH发生发展中的作用，在创新ONFH分子发病机制的同时，也为

早期分子预警及人群防治提出分子靶点及科学依据。

目的：

本研究通过联合转录组测序和深度生物信息学分析技术，解析lncRNA驱动

ONFH的lncRNA-miRNA-mRNA分子损伤网络，并识别ONFH血浆lncRNA早

期分子预警标志物，为建立ONFH早期分子预警体系奠定科学基础。

方法：

1.建立ONFH病例对照体系：经吉林大学第二医院伦理委员会批准，ONFH

病例对照转录组测序体系入组ONFH组9例，Control组6例。两组年龄、性别

及BMI要求无统计学差异。ONFH病例对照PCR验证体系入组ONFH组45例，

Control组45例。

I

2.ONFH血浆lncRNA表达谱研究：15例血浆样本提取总RNA后进行转录

组测序，获取lncRNA差异表达谱（|Foldchange|≥2且Qvalue≤0.05）。根据

lncRNA的Foldchange（FC）值、Qvalue（Q）值和其在各样本中的表达水平，

筛选出TOP5上/下调lncRNA。

3.ONFH血浆差异表达lncRNA的靶向预测：通过lncRNA结合位点权威预

测数据库starBase和LncBase预测lncRNA-miRNA可结合性。通过miRNA结合

位点权威预测数据库miRDB、miRWalk和mirtarBase预测miRNA-mRNA可结

合性。从而识别lncRNA调控的下游miRNA及mRNA分子靶点。

4.ONFH血浆差异表达lncRNA生物信息学分析：通过基因本体论、代谢通

路和蛋白质互作网络等多种生物信息学数据库联合分析，筛查lncRNA调控的关

键信号通路和分子靶点。

5.ONFH血浆差异表达lncRNA测序数据准确性的验证：在现有研究和深度

生物信息学的综合分析后，选择lncRNAFAM201A、MIR100HG、PELATON和

WDR11-AS1，在90例ONFH病例对照体系中，通过qRT-PCR检测验证测序数

据的准确性。

结果：

1.转录组测序的分析结果显示，共424个lncRNA在两组间显著差异表达，

其中381个表达下调，43个表达上调。从中筛选出5个上/下调最显著的lncRNA，

分别为LINC00630、MRPS30-DT、LINC01106、FAM201A、MIR100HG、MAGI2-

AS3、PELATON、SNHG16、SNHG1