第七单元 重组DNA技术的基本工具（教师版）.docx

第三章基因工程

第1节重组DNA技术的基本工具

一、基因工程及其诞生与发展

1．基因工程的概念:基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物制品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫重组DNA技术。（P67）

（1）原理：重组DNA技术。

（2）操作对象：基因。

（3）操作场所：生物体外。

（4）操作水平：分子水平。

（5）操作结果：赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。

2.为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？

（1）DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。

（2）双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。

3.为什么一种生物的基因可在另一种生物细胞内表达出相应性状？

（1）基因是控制生物性状的独立遗传单位。

（2）传信息的传递都遵循中心法则。

（3）生物界共同一套遗传密码。

2．基因工程的诞生和发展

(1)基因工程的诞生

①1944年，艾弗里等人通过肺炎链球菌转化实验证明了遗传物质是DNA，还证明了DNA可以在同种生物的不同个体之间转移。（P68）

②1953年，沃森和克里克建立了DNA双螺旋结构模型并提出了遗传物质自我复制的假说。（P68）

③1961年，尼伦伯格和马太破译了第一个编码氨基酸的密码子。（P68）

④20世纪70年代初，多种限制酶、DNA连接酶和逆转录酶被相继发现，为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。（P68）

⑤1973年，科学家证明质粒可以作为基因工程的载体，构建重组DNA，使外源基因在原核细胞中成功表达，并实现物种间的基因交流。（P69）

(2)基因工程的发展

①1982年，第一个基因工程药物——重组人胰岛素被批准上市。（P69）

②1984年，我国科学家朱作言领导的团队培育出世界上第一条转基因鱼。（P69）

③1985年，穆里斯等人发明PCR，为获取目的基因提供了有效手段。（P69）

④1990年，人类基因组计划启动。2003年，该计划的测序任务顺利完成。（P69）

⑤21世纪以来，科学家发明了多种高通量测序技术，可以实现低成本测定大量核酸序列，加速了人们对基因序列的了解。（P69）

⑥2013年，华人科学家张锋及其团队首次报道利用最新的基因组编辑技术编辑了哺乳动物基因组。（P69）

二、DNA重组技术的基本工具

1．限制性内切核酸酶(又称限制酶)—“分子手术刀”（P71）

（1）来源：主要来自原核生物。（P71）

（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（确切来说应该是催化磷酸二酯键断开；功能中两个“特定”体现了酶的专一性。）。（P71）

（3）限制酶识别序列：大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成。（P71）

（4）结果：产生黏性末端或平末端。（P71）

（5）说出产生下列末端的条件：（P71）

①黏性末端：限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开。

②平末端：限制酶在它识别序列的中轴线处切开。

（6）限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么？（P71思考）

切割外源DNA、使之失效，以保证自身安全。

（7）限制酶为什么不会切割自身的DNA？

原核生物中不存在该酶的识别序列或识别序列已被修饰。

（8）应用：已知限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓AATTC和CCC↓GGG，在图中写出两种限制酶切割DNA后产生的末端并写出末端的种类。

EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶识别的碱基序列不同，切割位点不同(填“相同”或“不同”)，说明限制酶具有专一性。

（9）不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义？使构建载体时，切割位点的选择范围扩大。

资料卡——限制酶名字的由来（P72）

用生物属名的头一个字母与种加词的头两个字母，组成了3个字母的略语，以此来表示这个酶是从哪种生物中分离出来的。

例如一种限制酶是从大肠杆菌（Escherichiacoli）的R型菌株分离来的，就用字母EcoR表示；如果它是从大肠杆菌R型菌株中分离出来的第一种限制酶，则进一步表示成EcoRⅠ。

2．DNA连接酶—“分子缝合针”

(1)DNA连接酶的功能：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。（P72）

(2)种类[填表]

种类

比较

E.coliDNA连接酶

T4DNA连接酶

来源

大肠杆菌

T4噬菌体

特点

只能连接黏性末端

既可以连接黏性末端，又可以连接平末端

（3）T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端的效