新教材高中生物第1章发酵工程第2节发酵工程的无菌技术第1课时发酵工程的灭菌方法设备和器具教师用书苏教.docVIP

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其次节发酵工程的无菌技术

第1课时发酵工程的灭菌方法、设备和器具

课标内容要求

核心素养对接

1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培育物的前提。

2.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。

生命观念：驾驭常用的灭菌方法及特点、灭菌设备及器具的运用方法，认同无菌技术在微生物培育中的重要作用。

科学思维：依据灭菌对象及试验要求选择正确的灭菌方法、设备及器具。

社会责任：培育有菌意识，养成良好的个人生活习惯，主动维护公共卫生。

一、发酵工程的灭菌方法

1．无菌技术

(1)定义：在操作过程中，保持物品与操作区域的无菌状态并不被微生物污染的技术。

(2)核心：灭菌。

2．灭菌方法、原理及应用

灭菌方法

原理

应用(特点)

化学试剂

灭菌法

甲醛、氯、高锰酸钾等化学试剂能破坏微生物的蛋白质或细胞结构，具有杀菌作用

不用于培育基的灭菌(灭菌剂可能会与培育基中的一些成分发生作用)

射线灭菌法

利用紫外线、X射线、γ射线等产生的高能粒子进行灭菌

一般用于表面和空气的灭菌(射线的穿透力弱)

干热灭菌法

利用干热空气灭菌(干热空气灭菌法)；利用火焰灼烧灭菌(火焰灼烧法)

干热空气灭菌法主要用于要求保持干燥的试验器具；火焰灼烧法常用于接种等操作过程

湿热灭菌法

利用饱和蒸汽进行灭菌，蒸汽的穿透力大，与较低温的物体表面接触时可放出大量能量，菌体蛋白质易凝固

培育基及容器的灭菌；相同温度下湿热灭菌比干热灭菌更有效

过滤除菌法

通过过滤阻留微生物从而达到除菌目的

大量制备无菌空气；产品提取过程中用于处理料液获得无菌产品

二、发酵工程的灭菌设备

1．电热鼓风干燥箱

(1)适用对象：空的玻璃器皿(如培育皿、离心管、移液管)、金属用具(如镊子、手术刀)和其他耐高温的物品(如菌种保藏采纳的沙土管、石蜡油、碳酸钙)的灭菌。不适用于带有胶皮或塑料的物品、液体及固体培育基的灭菌。

(2)优点：使灭菌器皿保持干燥。

(3)灭菌标准：一般以能否杀死细菌的芽孢作为彻底灭菌的标准，温度需提高到约160℃，加热2～3h。

(4)留意平安事项：不得将易腐、易燃、易爆物品放入箱内干燥灭菌；干燥箱工作时，必需将风机开关打开，否则会导致电机或传感器烧坏；箱内常常保持清洁，长期不用应套好防尘罩，放置在干燥的室内等。

2．高压蒸汽灭菌锅

(1)灭菌原理：在一个密闭的锅内，水的沸点随蒸汽压力的增高而上升，加压的同时提高蒸汽的温度，使锅内的待灭菌物品在肯定压力和温度等条件下，杀死其中全部微生物的养分体及其芽孢。

(2)类型：手动式高压蒸汽灭菌锅和全自动高压蒸汽灭菌锅。

(3)留意事项：操作人员必需在现场规范操作，严格限制热源维持灭菌时的压力。锅内压力过高，不仅培育基的养分成分会被破坏，而且高压锅超过耐压范围后可能会发生爆炸，造成伤人事故等。

(4)高压蒸汽灭菌锅的运用步骤

加水(加水的量不行过少，防止灭菌锅烧干)

↓

装锅(灭菌桶至少留1/3空间，盖好锅盖，对称的旋紧锅盖四周的固定螺栓)

↓

加热

↓

排空冷空气(加热后，随着锅内压力渐渐增加，须打开排气阀，排出锅内残留的冷空气。当压力表指针回降到“0”时，关闭气阀，接着加热)

↓

保温保压(锅内压力升至约103kPa、温度达到121℃，维持15～20min)

↓

出锅(压力表指针降至“0”点，待温度下降后，打开排气阀，旋开固定螺栓，开盖，取出灭菌物品)

3．空气除菌设备

(1)适用对象：空气除菌是好氧发酵的关键环节，发酵工程中常采纳空气过滤除菌的方法来净化所需空气。

(2)原理：让含菌空气通过无菌干燥的过滤介质，以阻截空气中所含微生物。

(3)不同发酵过程对空气无菌程度的要求：不同发酵过程对空气无菌程度的要求不同，例如，酵母菌繁殖速度快，对空气的无菌要求相对较低，制备氨基酸、抗生素等的发酵过程，所需的微生物对空气无菌的要求较高。

三、发酵工程的无菌操作器具

1．接种器具

(1)接种的概念：在无菌条件下将微生物接入培育基的操作过程。

(2)常用的接种器具：玻璃涂布器、接种针、接种环等。

(3)应用

①玻璃涂布器用于平板稀释涂布接种。

②接种针用于穿刺接种。

③接种环用于斜面接种或在平板培育基上划线接种。

2．转移器具

(1)移液管：用来精确移取肯定体积的溶液或分装化学试剂的量器，一般用于转移部分液体培育物、系列稀释微生物或分装化学试剂。

(2)刻度移液管：具有刻度的直形玻璃管。在须要限制试剂加入量时，一般运用刻度移液管。

(3)运用要点

①用拇指及中指捏住管颈标线以上的地方，将移液管插入待取溶液液面下约1cm。(留意：移液管不应伸入太多，以免管尖外壁粘有过多溶液；也不应伸入太少，以免液面下降后而吸空。)

②一手拿着橡皮吸球轻轻将溶液吸上，眼睛凝视正在上升