2024_2025年高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养二教案新人教版选修1.docVIP

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微生物的试验室培育

学问?巧学

一、培育基

1.培育基的概念及其分类：微生物生命活动所须要的养分基质称为培育基。培育基有许多种，依据物理状态可以分为固体、半固体和液体培育基；依据化学组成可以分为自然培育基和合成培育基，依据用途可分为选择培育基和鉴别培育基等。

辨析比较

培育基的分类

2.培育基的成分：各种培育基的成分是不同的，但是全部培育基都包含微生物生长繁殖所需的必需成分，如水、无机盐、碳源和氮源等，有些微生物生命活动过程中还须要一些微量有机物——生长因子。

联想发散

碳源和氮源的种类和作用

功能

举例

碳源

为微生物供应碳素养分、能源物质，形成代谢产物，构成细胞成分

无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等

氮源

为微生物供应氮素养分、合成蛋白质、核酸、含氮代谢产物

无机化合物：氮、氨、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等

3.培育基的其他条件：除了养分物质外，培育基还要满意微生物生长所须要的温度、酸碱度以及氧气含量等条件。不同微生物所需的这些条件是不同的，例如培育真菌时，pH要调整到5.0～6.0之间，培育细菌时要调整到6.5～7.5之间，培育放线菌时要调整到7.5～8.5之间。

二、无菌技术

1.无菌技术的内容

（1）对试验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

（2）对培育微生物所用的器皿、接种工具和培育基等器具进行灭菌

（3）试验操作的过程要保证无菌。

（4）要避开灭过菌的材料再次被污染。

2.灭菌方法

(1)灼烧灭菌：主要用于接种环（针）或其他金属工具的灭菌。

(2)干热灭菌：将待灭菌的物品放入干热灭菌箱内，在160～170℃

(3)高压蒸气灭菌：将待灭菌的物品放入盛有适量水的高压蒸气灭菌锅内，把锅内水加热至沸腾，将其中的冷空气彻底解除后，将锅密闭后接着加热使锅内温度上升，压力增加，最终温度可以达到100℃以上，常用的灭菌锅灭菌时压力为100kPa，温度为121

（4）紫外线灭菌:这种方法只能适用于表面灭菌和空气灭菌。

深化升华灭菌所依据的原理基本都是使菌体内的蛋白质和核酸发生变性，从而达到杀菌的效果.

三、制备培育基和纯化大肠杆菌

1.制备牛肉膏蛋白胨固体培育基：首先要依据培育基的配方要求，计算出各种成分的用量，然后用天平精确地称量，对于牛肉膏和蛋白胨等易吸潮的物质称量时要快速，称量完成后要刚好盖上瓶盖；为了使各种成分混合匀称，须要将它们溶化，溶化后千万不要遗忘调整pH；溶化后的培育基分装完成后放入高压蒸气灭菌锅内进行灭菌（平板培育基一般是灭菌后再分装）。

深化升华培育基的配置要遵循肯定的原则，第一，目的要明确，要依据所培育的微生物的种类、培育的目的选择原料；其次，养分要协调，配制培育基时必须要留意各种养分物质的浓度和比例，否则会产生不良后果；第三，pH要相宜，这是因为各种微生物相宜生长的pH范围不同。

2.纯化大肠杆菌时须要留意的问题

（1）每次划线之前都要将接种环上的剩余物质烧掉以灭菌，整个操作完成后也要将接种环灭菌。

（2）接种环灼烧完成后，要等到其冷却后才能用于接种，以防培育基溶化、划线不整齐或杀死菌种。

（3）作其次次划线时，要从上一次划线的末端起先，使微生物随划线次数的增加而削减，并逐步分散，最终可在平板表面得到单个菌落。

（4）用涂布法接种时，将涂布器的末端浸在盛有体积分数为70％的酒精的烧杯中，取出时要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。

（5）操作过程都要在火焰旁边的无菌区进行。

（6）整个过程中要留意防火。

疑点突破（1）未接种的培育基表面若有菌落生长，说明培育基已被污染，必需更换或者重新灭菌。

（2）在接种大肠杆菌的培育基上可以视察到独立的菌落，有光滑型菌落、粗糙型菌落、黏液型菌落等。

（3）培育12h和24h菌落的大小不同，后者菌落大，灰色加深，光泽度强。

（4）若在培育基中视察到不同形态的菌落，则说明菌液不纯或者操作过程中被杂菌污染。

问题?探究

问题1配制培育基时，除了养分要齐全外，各种养分物质的比例也要适中，而且还要调整好pH、温度等，试从多个方面探究其缘由。

思路:虽然微生物个体微小，但是其代谢过程丝毫不比多细胞生物简洁，它也要不断地进行吸水、汲取养分物质、代谢、排泄等过程。凡是影响这些过程的因素，在配制培育基时都要考虑。

探究:微生物的生命活动除了须要各种养分物质外，还须要相宜的外界环境，例如外界养分物质浓度过高时，会影响细胞吸水；外界溶氧不足时会影响需氧微生物呼吸；外界温度过高或者过低时会影响酶的活性。另外各种物质的比例也会影响微生物的生命活动，例如在培育谷氨酸棒状杆菌时，假如C∶N为4∶1，则菌体会大量繁殖，假