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细胞膜的渗透性试验汇报
试验目的:
1.理解细胞膜的渗透性
2.理解多种小分子物质跨膜进入紅细胞的速度
试验原理:
1.细胞膜具有对物质选择透过的生理功能。脂溶性越高通透性越大,水溶性越高通透性越小;非极性分子比极性轻易透过,小分子比大分子轻易透过。水分子可通过由膜脂运动而产生的间隙。非极性的小分子如O2、CO2、N2可以很快透过脂双层,不带电荷的极性小分子,如尿素、甘油等也可以透过人工脂双层,尽管速度较慢,分子量略大一点的葡萄糖、蔗糖则很难透过,而膜对带电荷的物质如:H+、Na+、K+、Cl–、HCO3–是高度不通透的。
2.hemolysis(溶血現象):渗透紅细胞的溶质能提高紅细胞的渗透压,使水进入细胞,引起细胞吸水胀破;既紅细胞膜破裂,血紅蛋白从紅细胞中逸出的現象称為溶血現象。
3.isotonicsolution(等渗溶液):渗透压与血浆渗透压相等的溶液称為等渗溶液。
4.Hypertonicsolution(高渗溶液):渗透压高于血浆渗透压的溶液称為高渗溶液。
5.Hypotonicsolution(低渗溶液):渗透压低于血浆渗透压的溶液称為低渗溶液。
6.semipermeable(半透性):膜或膜状构造只容許溶剂(一般是水)或部分溶质(一般為小分子物质)透过,而不容許其他溶质(一般為大分子物质)透过的特性。
7.osmosis(渗透作用):膜两侧溶液浓度存在差异,导致化学势能差,在势能差的驱动下,溶剂穿过对溶质不透膜的过程。
试验材料及作用:
150mmol/LNaCl,蒸馏水,5mmol/LNaCl,65mmol/LNaCl,0.8mol/L甲醇,0.8mol/L乙醇,0.8mol/L丙醇,0.8mol/L乙二醇,0.8mol/L丙三醇,2%TritonX-100,氯仿(三氯甲烷)。
1.NaCl的作用:将正常紅细胞悬浮于不一样浓度的NaCI溶液中:等渗溶液中的紅细胞保持正常大小和双凹圆碟形;渗透压递减的一系列溶液中,紅细胞逐渐胀大并双侧凸起,当体积增長30%時成為球形;体积增長45%~60%则细胞膜损伤而发生溶血,这時血紅蛋白逸出细胞外,仅留下一种双凹圆碟形细胞膜空壳,称為血影细胞(ghostcell)。正常人的紅细胞一般在0.42%NaCI溶液中時开始出現溶血,在0.35%NaCI溶液中時完全溶血.
2.甲醇:小分子、亲脂性的非极性分子甲醇為低渗溶液,轻易溶解于脂双层,并迅速透过,提高紅细胞的渗透压,促使水分进入细胞,引起溶血。
乙醇:乙醇是脂溶性小分子,可以自由扩散进出细胞。紅细胞外有相对高浓度的乙醇,大量乙醇分子顺浓度差进入紅细胞,使紅细胞内渗透压高于紅细胞外渗透压,水通道开放,大量水分子进入紅细胞,发生溶血。
丙醇,丙二醇,丙三醇的作用与甲醇,乙醇的作用相似,都是脂溶性分子,伴随分子量的增長,分子的增大,溶血時间增長。
去垢剂是某些具有亲水的极性基团和疏水的非极性基团的長链分子。非离子型去垢剂如TritonX-100((聚乙二醇辛基苯基醚))可与脂双层形成混合微团,它們重要与蛋白质疏水部位互相作用,一般不会引起蛋白质变性。而离子型去垢剂与蛋白結合后可变化蛋白质构造,使之变性,尤其是加热后可使蛋白质解离為单体,如十二烷基磺酸钠(SDS)等。多种去污剂可以溶解细胞膜上的磷脂化合物,从而使细胞膜破裂,释放出细胞内物质。
6.氯仿:氯仿是很好的脂类萃取剂,不可以发生溶血現象。
试验过程:
取新鲜羊血,加入适量抗凝剂备用
观测加入不一样溶液之后的溶血現象。
渗透性计時比较
试验成果分析:
1.蒸馏水和150mmol/LNaCl:
试剂
150mmol/LNaCl
蒸馏水
变化
不溶血,静置半小時后分层,上层无色透明,下层紅色不透明。
溶血,溶液通体一色,紅色透明
溶血時间
——
1s以内
显微观测
完整的紅细胞
无完整的紅细胞,有絮状物质
結论:Na+和Cl-不能以自由扩散方式通过细胞膜,0.15mol/LNaCl不能导致溶血;而H2O可以很快地进入细胞内,使细胞膨胀溶血。
不一样浓度的NaCl
试剂
5mmol/LNaCl
65mmol/LNaCl
150mmol/LNaCl
变化
迅速溶血
溶血
不溶血,静置半小時后分层,上层无色透明,下层紅色不透明。
溶血時间
5s
10s
——
显微观测
无完整紅细胞,絮状物质,能看見少許血影细胞
无完整紅细胞,有血影细胞
完整的紅细胞
結论:150mmol/LNaCl溶液与羊血细胞是等渗溶液,因此不能溶血,5mmol/LNaCl与65mmol/LNaCl溶液為低渗溶液,可以是紅细胞吸水涨裂。浓度越低,与细
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