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摘要

鱼腥藻苹果酸脱氢酶的酶学及生物信息学研究

摘要

苹果酸脱氢酶（malatedehydrogenase，MDH）主要参与三羧酸（TCA）循

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环的最后一步，在辅酶Ⅰ(NAD)或辅酶Ⅱ(NADP)的作用下催化苹果酸与草酰乙

酸之间相互转化，在动物、植物以及细菌等生物中广泛存在，作为糖代谢的关键

酶之一，在能量生产以及多种代谢途径中起着至关重要的作用。本研究在大肠杆

菌（Escherichiacoli）中异源表达并纯化了鱼腥藻属（Anabaena）三个代表型菌

Anabaenasp.PCC7120Anabaenasp.PCC7108Anabaenasp.YBS01

株（、、）来源

的MDH，并分析其理化特征及酶学性质。

生物信息学分析显示，鱼腥藻MDH亚基的相对分子量在35kDa左右，且

蛋白质的稳定系数较差，属于不稳定蛋白。多重序列比对显示鱼腥藻MDH单个

亚基具有9个α-螺旋、14个β-折叠，在N端附近是具有一段典型的“GXGXXG”

罗斯曼折叠（Rossman-fold）基序。系统进化分析发现，蓝藻MDH与L-LDH的

MDHL-LDH

亲缘关系较近，在进化树分支上处于靠近根的位置，由此暗示与

可能起源于同一祖先，并分别朝着不同底物特异性方向演化。

凝胶过滤层析与SDS检测显示，鱼腥藻MDH是典型的同源二聚体，

其亚基大小约为35kDa。本实验中Anabaenasp.PCC7120MDH(Aa7120MDH)

与Anabaenasp.PCC7108MDH(Aa7108MDH)的最适催化反应pH均为7.5，

Anabaenasp.YBS01MDH(AaYBS01MDH)的最适pH为8.0；鱼腥藻MDH的最

适催化反应温度要高于多数已知其它来源MDH的最适温度，其中Aa7120MDH

的最适温度约为65℃，Aa7108MDH与AaYBS01MDH的最适温度均为75℃。

从热稳定性来看，Aa7120MDH的热稳定性要高于Aa7108MDH与AaYBS01MDH，

但鱼腥藻MDH相对于其它已知蓝藻MDH的热稳定性较差。

酶动力学研究显示，鱼腥藻MDH在催化草酰乙酸与苹果酸相互转化反应中，

更加倾向于将草酰乙酸还原成苹果酸方向的还原反应。并且实验发现，鱼腥藻

MDH既能够以NADH为辅酶催化反应，也可以NADPH为辅酶，即具有双辅酶

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依赖性特征。以NADH为辅酶时，Aa7120MDH的k/K值为0.3317μMs，

catm

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Aa7108MDH的k/K值为0.1020μMs，AaYBS01MDH的k/K值为0.1090

catmcatm

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μMs；以NADPH为辅酶时，Aa7120MDH的k/K值为0.09899μMs，

catm

-1-1

Aa7108MDH的k/K值为0.00920μMs，AaYBS01