DB37T 3113-2018 猪圆环病毒2型抗体胶体金快速检测技术规范.docxVIP

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DB37

山东省地方标准

DB37/T3113—2018

猪圆环病毒2型抗体胶体金快速检测技术规范

AntibodiesDetectionofPorcineCircovirusType2withColloidalGoldImmunochromatographicAssay

2018-02-02发布2018-03-02实施山东省质量技术监督局发布

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出。

本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准起草人：李俊、时建立、彭喆、吴晓燕、徐绍建、于江、孙文博、丛晓燕、朱晓琳、韩红、吴家强、杜以军、陈蕾、陈智、刘畅。

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猪圆环病毒2型抗体胶体金快速检测技术规范

1范围

本标准规定了猪圆环病毒2型(PorcineCircovirusType2,PCV2)的抗体胶体金试纸条制备方法

及试纸条使用规范。

本标准适用于猪圆环病毒2型的抗体快速检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语与定义

下列术语与定义适用于本标准。

3.1

PVC板

聚氯乙烯板。

3.2

BSA

牛血清白蛋白。

3.3

NC膜

硝酸纤维素膜。3.4

PBS

磷酸缓冲盐溶液。

4材料及设备

4.1主要仪器设备

4.1.1微量移液器(最大量程分别为10μL、20μL、100μL、1000μL)。

4.1.220000r/min低温高速离心机。

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4.1.3喷膜仪。

4.1.4切条机。

4.1.5PVC板。

4.1.60.22μm无菌过滤器。

4.1.7紫外分光光度计。

4.1.8电子天平精度为：0.001g。

4.2主要试剂或材料

4.2.1BSA:配制见附录A.1。

4.2.2氯金酸：配制见附录A.2。

4.2.3NC膜。

4.2.4玻璃纤维膜。

4.2.5吸水纸。

4.2.6碳酸钾分析纯。

4.2.7猪圆环病毒2型Cap蛋白。

4.2.8羊抗兔IgG。

4.2.91×PBS溶液(pH值7.4):配制见附录A.3。

4.2.10超纯水：符合GB/T6682,三级。

4.2.110.1mol/LTris-HCL:配制见附录A.4。

4.2.12Tween-20分析纯。

4.2.13聚酯纤维膜。

5免疫胶体金试纸条的制备

5.1胶体金的制备

所有试剂均需提前经0.22μm无菌滤器滤过。

5.1.1用电炉加热99mL超纯水至沸。

5.1.2加入1mL1%氯金酸溶液，继续加热3min。

5.1.3再缓慢加入2mL1%柠檬酸钠溶液，边加入边用磁力搅拌器进行搅拌。

5.1.4继续加热，颜色由灰色变为黑色，继而变为亮红色停止加热(约5min)。

5.1.5避光室温冷却后，用超纯水补足至100mL。

5.1.6用紫外分光光度计分别测其在520nm和535nm处的吸光度值，使其吸光度值在0.8～1.0之间即可。

5.2胶体金标记抗原和标记pH值

用0.2mol/L碳酸钾将胶体金溶液调节pH值为8.0后，加入纯化后的猪圆环病毒Cap蛋白，使其终浓度为10μg/mL。

5.3金标抗原的封闭和纯化

5.3.1在金标溶液中加入羊抗兔(IgG),使其终浓度为1mg/mL。

5.3.2加入1/10体积的10%BSA溶液(终浓度1%为封闭液)封闭，混匀并静置15min。

5.3.34℃,8000r/min离心20min弃上清。

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5.3.4用原体积1/20且含有1