蛋白翻译课件.ppt

較多的起始因數參與真核生物翻譯的起始BindingtoribosomalsubunitseIF6eIF3eIF4cBindingtothemRNAeIF4BeIF4FeIF4AeIF4EInvolvedininitiationtRNAdeliveryeIF2eIF2BDisplaceotherfactorseIF55’帽子結構如何促進起始反應？?帽子在mRNA與40S亞基結合過程中起穩定作用?帶帽子的mRNA5’端與18SrRNA的3’端序列之間存在不同於SD序列的堿基配對型的相互作用GCCACCAUGGGCCAUGAUGGKOZAK規則：第四位的偏好堿基是G；AUG的5‘端約15bp範圍的側翼序列內不含堿基T；在-3，-6和-9位，G是偏好堿基；除-3，-6和-9位，在整個側翼序列區，C是偏好堿基。真核引物設計在AUG前加上GCCACC來增強翻譯的效率。3’polyA如何參與翻譯起始物的形成？TrytoexplainhowthemRNApoly-Atailcontributestothetranslationefficiency?3、肽鏈的延伸?起始複合物生成和第一個氨基酸（fMet/Met-tRNA）與核糖體結合以後，肽鏈開始伸長。?按照mRNA範本密碼子的排列，氨基酸通過新生肽鍵的方式被有序地結合上去。?肽鏈延伸中的每個氨基酸的結合延伸都包括:AA-tRNA與核糖體結合;肽鍵的生成;移位。參與肽鏈延伸的組分：?功能核糖體（起始複合物）?AA-tRNA?延伸因數（EF-Tu，EF-Ts和EF-G）?GTP,Mg2+?肽基轉移酶Step1：後續AA-tRNA與核糖體結合新的氨醯-tRNA結合到A位。該氨醯-tRNA首先與EFTu·GTP形成複合物，進入核糖體的A位，水解產生GDP並在EF-Ts的作用下釋放GDP並使EF-Tu結合另一分子GTP，進入新一輪迴圈。AA2?由於EF-Tu只能與fMet-tRNA以外的其他AA-tRNA起反應，所以起始tRNA不會被結合到A位上，因此，mRNA內部的AUG不會被起始tRNA讀出，肽鏈中間不會出現甲醯甲硫氨酸。EF-Tu具有AA-tRNA結合特異性？mRNA內部的AUG的識別問題Step2：肽鍵的生成?在核糖體·mRNA·AA-tRNA複合物中，AA-tRNA佔據A位，fMet-tRNAfMet佔據P位。?P位攜帶的fMet與tRNA分離,與A位攜帶的新的氨基酸形成肽鍵。?構象的變化導致大亞基向3’端移動，使兩個tRNA的上端移到大亞基的E和P位，而在小亞基中它們仍位於P和A位。肽鍵形成Step3：移位核糖體通過EF-G介導的GTP水解所提供的能量向mRNA範本3’末端移動一個密碼子，使兩個tRNA完全進入E位和P位(去氨醯－tRNA被擠入E位;肽基-tRNA進入P位)，mRNA上的第三位密碼子對應於A位被空出來，準備開始新一輪肽鏈延伸。核糖體沿mRNA移動與肽基-tRNA的移位這兩個過程是耦聯的。肽鏈延伸是由許多個這樣的反應組成的。?原核生物中每次反應共需3個延伸因數，EF-Tu、EF-Ts及EF-G;真核生物細胞需EF-1及EF-2?消耗2個GTP，向生長中的肽鏈加上一個氨基酸。多肽鏈上肽鍵的形成——縮合反應參與肽鏈終止的因數：?mRNA上的終止密碼子?GTP?釋放因數（Releasefactor，RF）4、肽鏈的終止肽鏈終止過程?當終止密碼子UAA、UAG或UGA出現在核糖體的A位時，沒有相應的AA-tRNA能與之結合.?釋放因數RF具有GTP酶活性，能識別這些密碼子並與之結合，水解P位上多肽鏈與tRNA之間的二酯鍵，釋放新生的肽鏈和tRNA。?核糖體大、小亞基解體，蛋白質合成結束。釋放因數(終止因數)I類釋放因數：?識別終止密碼子，?能催化新合成的多肽鏈從P位點的tRNA中水解釋放出來；II類釋放因數：?在多肽鏈釋放後刺激I類釋放因數從核糖體中解離出來。細菌細胞:?RF1(I類)能識別UAG和UAA，?RF2(I類)識別UGA和UAA。一旦RF與終止密碼相結合，它們就能