海马GHSR1a信号在应激促恐惧记忆泛化中的作用及机制研究.pdfVIP

海马GHSR1a信号在应激促恐惧记忆泛化中的作用及机制研究

摘要

研究背景及意义:经历突发威胁事件或受到强烈的刺激后，个体会产生恐惧

反应并形成恐惧记忆。随着时间推移，恐惧记忆从创伤情境转移到相类似的情境

中，个体在类似的情境中也表现出恐惧反应，即发生了恐惧记忆的泛化。恐惧记

忆的泛化是个体应对环境潜在威胁产生的一种适应性生理反应，有助于识别和

避开潜在的危险。但是恐惧记忆的过度泛化则会对个体产生不利的影响，因无法

有效区分安全环境和威胁环境，个体在安全的环境中仍表现出不适当和无法控

制的恐惧反应。创伤后应激障碍(post‐traumaticstressdisorder，PTSD)是机体在经

历自然灾害、暴力犯罪、目睹他人死亡等强烈的创伤性事件后产生的精神障碍综

合症，患者的典型表现就是出现恐惧记忆的过度泛化，即在安全的环境中仍保持

高度警觉。这不仅严重影响个体的日常生活，还会造成神经功能失调和持续的焦

虑状态，给患者带来极大的痛苦。恐惧记忆过度泛化的神经机制目前尚不清楚，

是近年备受关注的研究热点。

大量研究表明，海马是记忆泛化产生的关键脑区，海马DG区的模式分离功

能对个体区分不同的情境记忆至关重要。模式分离通过降低不同记忆之间的神

经表征重叠，增强记忆的特异性和准确性，使个体能够准确区分在时间或空间上

紧密相连但相对独立的事件。研究提示，恐惧记忆的过度泛化与海马DG区的神

经发生和模式分离密切相关。海马DG区的新生神经元可以通过促进模式分离

维持长期记忆的精确性。

生长激素促泌素（ghrelin）是一种主要由胃粘膜细胞分泌的肽类激素。酰基

化的ghrelin通过结合生长激素促泌素受体1a（growthhormonesecretagogue

receptor，GHSR1a）而发挥促进摄食、维持代谢稳态等生理功能。GHSR1a是一

种重要的G蛋白偶联受体，该受体不仅富集于下丘脑和垂体，在与学习记忆密

切相关的多个脑区如海马、皮层等也有较为丰富的表达。Ghrelin/GHSR1a信号

在应激反应和情绪调控中的作用近来也被密切关注。我们实验室的前期研究发

现单次延长应激刺激（singleprolongstress，SPS）15天后，小鼠海马区GHSR1a

的表达明显增加，同时小鼠出现恐惧记忆的过度泛化；GHSR1a缺失则抑制SPS

应激小鼠的恐惧记忆过度泛化。这些结果提示SPS应激所导致的恐惧记忆过度

泛化与海马GHSR1a信号之间存在着密切的关系，SPS应激导致的海马GHSR1a

表达上调可能参与介导恐惧记忆的过度泛化。

研究目的:进一步明确海马GHSR1a信号在应激促恐惧记忆泛化中的作用并

探讨其神经机制。

研究内容:本研究采用SPS应激建立PTSD模型小鼠；采用高架十字迷宫、

旷场、悬尾、强迫游泳及场景恐惧行为范式，明确SPS应激小鼠的焦虑及抑郁

样行为，并动态考察SPS应激造成恐惧记忆发生泛化的时间进程；采用实时荧

光定量PCR技术对SPS应激后小鼠海马GHSR1a的动态表达进行量化分析；采

用c-FOS免疫荧光染色技术考察小鼠海马各亚区神经元在不同场景中的激活情

况；利用时间诱导型IEG启动子荧光报告（RAM病毒）小鼠，结合c-FOS免疫

荧光染色技术对场景恐惧记忆印迹细胞的数量进行实时标记和量化分析；利用

BrdU标记和免疫荧光成像技术对海马DG区的神经发生进行量化分析；采用荧

+

光原位杂交技术，考察SPS应激后小鼠海马αCaMKⅡ神经元中GHSR1a的表达

+

情况；最后采用脑区病毒注射技术，通过双向操控海马区αCaMKII神经元

GHSR1a的表达，再次验证GHSR1a信号对SPS应激小鼠场景恐惧记忆泛化过

程的影响。

研究结果:

1.SPS应激小鼠在应激后第7天表现出明显的焦虑和抑郁样行为。具体表现

为：与对照非应激小鼠相比，SP