葛根素通过抑制JAK-STAT1信号传导减轻实验性自身免疫性心肌炎小鼠心肌损伤的机制研究.pdfVIP

葛根素通过抑制JAK-STAT1信号传导减轻实验性自身免疫性心肌

炎小鼠心肌损伤的机制研究

摘要

目的:心肌炎是一种由多种因素引起的心肌组织炎性病变。目前临床干预措施

以对症治疗为主，无法有效减轻心脏原位的炎症损伤。M1型巨噬细胞被认为通过

分泌大量促炎因子和趋化因子对心肌炎中炎症的发生和发展起着重要作用。葛根素

（Puerarin，PUE）是从葛根中分离的异黄酮衍生物，可作为膳食补充剂，具有广

泛的抗炎和抗氧化作用，但其抗炎作用的机制有待进一步研究。本研究旨在探讨

PUE是否通过影响实验性自身免疫性心肌炎（Experimentalautoimmune

myocarditis，EAM）小鼠模型中M1型巨噬细胞的JAK1/2-STAT1信号通路抑制M1

极化，减少炎症因子表达和炎性细胞浸润，从而抑制EAM模型小鼠由炎症导致的

心肌损伤。

方法:1.通过小动物超声检测PUE干预后EAM小鼠的心功能以及HE和Masson

染色观察小鼠心脏炎症浸润情况。

2.流式细胞术检测PUE干预后EAM小鼠脾脏中巨噬细胞表面标志物CD86的

表达水平，脾脏中Th1细胞分泌的IFN-γ细胞因子水平、以及Treg细胞表达FOXP3

转录因子水平。

3.体内实验通过qPCR和流式细胞术检测心脏组织中M1型相关细胞因子TNF-

α、IL-12p40、IL-12p70、IL-6、IL-23和IL-18的表达水平。体外实验LPS诱导

RAW264.7细胞M1极化，流式细胞术检测PUE干预后M1型表面标志物CD86表

达水平的变化。

4.体内实验Westernblotting检测各组心脏组织中M1极化相关信号分子p-

JAK1、JAK1、p-JAK2、JAK2、p-STAT1、STAT1、TNF-α和IFN-γ，以及细胞凋亡

相关分子Cleaved-Caspase9，BAX和Bcl2的表达水平。同时体外实验中，检测PUE

干预LPS+IFN-γ诱导的RAW264.7细胞后JAK-STAT1信号通路的激活情况以及下

游TNF-α、IFN-γ的表达。

5.体外诱导RAW264.7细胞M1极化，加入PUE干预后，使用共聚焦检测p-

STAT1在细胞中的定位及入核比例。

结果：1.小动物心脏超声结果显示PUE干预组小鼠的心功能较EAM组小鼠的

心功能有所改善。HE和Masson染色结果显示，PUE减少EAM模型小鼠心脏炎症

浸润及纤维化。

2.流式细胞术结果显示，PUE干预组较EAM模型组可以降低小鼠脾脏中巨噬

细胞表面标志物CD86的表达水平。脾脏中Th1细胞分泌的相关细胞因子IFN-γ水

平降低、Treg细胞比例升高。

3.在体内实验中，PUE干预组与EAM模型组小鼠相比，可以降低心脏组织中

M1型相关细胞因子TNF-α、IL-12p40、IL-12p70、IL-6、IL-23和IL-18的表达水

平。体外实验结果显示，PUE的干预可以显著降低LPS+IFN-γ诱导后RAW264.7细

胞M1型表面标志物CD86的平均荧光强度。

4.对M1极化信号通路进行检测，体内结果显示，心脏组织p-JAK2/JAK2、p-

STAT1/STAT1、TNF-α和IFN-γ的表达水平经过PUE干预后较EAM模型组降低，

p-JAK1/JAK1无变化。凋亡相关信号分子Cleaved-Caspase9，BAX表达水平降低和

抗凋亡蛋白Bcl2经过PUE干预后升高。在体外实验结果中显示，PUE处理可以降

低RAW细胞经过LPS+IFN-γ干预后JAK-STAT信号通路的激活情况，上游JAK1

的磷酸化水平并无明显改变，但是STAT1的磷酸化水平明显降低，同时下游基因

TNF-α、IFN-γ的表达水平也明显下调。

5.在体外实验中，WesternBlot结果和共聚焦显微镜检测结果显示葛根素可以抑

制RAW264.7细胞STAT1的磷酸化水平以及p-STAT1的入核。

结论：综上所述，本研究表明，PUE治疗有利于减轻EAM