2025秋《三维设计 新课标高考总复习 生物》课时验收评价（五十三） 重点研究“基因工程操作中限制酶的选择和PCR技术”.docx

课时验收评价（五十三）重点研究“基因工程操作中限制酶的选择和PCR技术”

1．为增强玉米抗旱性，研究者构建含有某微生物抗旱基因E的重组质粒，用农杆菌转化法转入玉米幼胚组织细胞中，获得抗旱的转基因玉米。下列相关叙述不正确的是()

A．提取该微生物mRNA逆转录为cDNA，通过PCR可获得大量目的基因

B．将重组质粒置于经CaCl2处理的农杆菌悬液中，可以获得转化的农杆菌

C．用农杆菌转化法将E基因转入玉米幼胚组织细胞需要严格进行无菌操作

D．用E蛋白的抗体进行抗原—抗体杂交，可在个体水平检测转基因玉米的抗旱性状

解析：选D用E蛋白的抗体进行抗原—抗体杂交，可在分子水平检测转基因玉米的抗旱性状，D错误。

2．如图是三种限制酶的脱氧核苷酸识别序列和切割位点示意图(↓表示切点)。下列相关分析错误的是()

A．这三种限制酶切割出的DNA片段末端都是黏性末端

B．不同限制酶切割DNA所得的黏性末端可能相同

C．能被限制酶3切割的DNA也能被限制酶1切割

D．同一个DNA经限制酶1和限制酶3分别切割后所得片段数一定相等

解析：选D能被限制酶3切割的DNA也能被限制酶1切割，但能被限制酶1切割的DNA不一定能被限制酶3切割，故同一个DNA经限制酶1和限制酶3分别切割后所得片段数不一定相等，C正确，D错误。

3．图甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位点。下列关于培育转基因大肠杆菌的叙述错误的是()

A．若通过PCR获取该目的基因，应该选用引物甲和引物丙

B．图中质粒和目的基因构建表达载体，应选用BclⅠ和HindⅢ剪切

C．若将基因表达载体导入受体细胞中，可选用Ca2＋处理法

D．在受体细胞中，氨苄青霉素抗性基因和目的基因可同时表达

解析：选D通过PCR获取目的基因时，两种引物分别和目的基因的两条单链结合，并沿相反的方向合成子链，故选用引物甲和引物丙，A正确；由甲图可知，选用BamHⅠ会破坏两种抗性基因，结合乙图可确定应选择BclⅠ和HindⅢ剪切，B正确；将目的基因导入大肠杆菌常采用Ca2＋处理法，C正确；构建重组质粒时目的基因插入氨苄青霉素抗性基因中，故氨苄青霉素抗性基因被破坏不能表达，D错误。

4．限制酶的发现为DNA的切割和功能基因的获得创造了条件。限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ的识别序列及切割位点分别为↓GATC、G↓AATTC、C↓GATCC。含某目的基因的DNA片段如图所示，若利用质粒A(含限制酶Sau3AⅠ、EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点各1个)构建基因表达载体，为克服目的基因和质粒A的自身环化以及目的基因与质粒的任意连接等。下列对限制酶的选择，正确的是()

A．用限制酶EcoRⅠ或BamHⅠ处理含某目的基因的DNA和质粒A

B．用限制酶Sau3AⅠ和BamHⅠ处理含某目的基因的DNA和质粒A

C．用限制酶Sau3AⅠ和EcoRⅠ处理含某目的基因的DNA和质粒A

D．用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ处理含某目的基因的DNA和质粒A

解析：选D用限制酶Sau3AⅠ切割目的基因会破坏目的基因，质粒含有限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，获取目的基因也可以用限制酶EcoRⅠ、BamHⅠ进行切割，但为了防止目的基因或质粒自身环化，需要使用不同种限制酶进行切割，则可以使用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ切割质粒和目的基因。

5．植株在干旱、低温等逆境中，脱水素(具有一定抗干旱胁迫和耐冷冻能力的蛋白质)被诱导表达，脱水素基因编码区共含678个碱基对。科学家利用如图所示PBⅠ121质粒，以及XbaⅠ和SacⅠ两种限制酶，运用农杆菌转化法，将脱水素基因导入草莓试管苗叶片细胞，再经植物组织培养获得脱水素基因过量表达的转基因草莓植株。下列相关叙述错误的是()

A．重组质粒利用SacⅠ和HindⅢ切割后能得到1500bp片段，则表明目的基因正确插入质粒

B．组织培养过程中，培养基需添加卡那霉素和新霉素以便筛选转基因植株

C．可以利用PCR技术鉴定目的基因是否整合到草莓染色体的DNA上

D．转基因草莓植株批量生产前需进行抗干旱、耐冷冻实验

解析：选B根据分析可知，由于重组质粒上移除1900bp而补充了脱水素基因的678个碱基对，加上未移除的822bp，所以用SacⅠ和HindⅢ切割重组质粒后，可得到822＋678＝1500bp的新片段，据此可确定目的基因正确插入了质粒，A正确；题中提供的限制酶切割位点对卡那霉素抗性基因没有影响，所以无论是否插入了目的基因，卡那霉素抗性基因都可以表达，起不到筛选转基因植株的作用，B错误；PCR技术是进行DNA扩增的技术，需要一段引物来进行扩增，依照脱水素基因的核苷酸序列设计一段引物，若能进行扩增，说明转入目的基因成功，C正确；植株批量生产前，需要在个体水平上进行抗干旱