酶工程第2章酶作用基本原理.pptxVIP

酶工程;酶促反应动力学

Kinericsofenzyme-catalyzedreation

;一、底物浓度对酶反应速度的影响;酶-底物中间复合物（ES-complex)假说：;;1、快速平衡法-米氏原始方程;

;;;当0.01Ks[S]，V=Vmax[S]/Ks，其反应速度与底物浓度成正比，一级反应;随着底物浓度的增加，反应速度不再成正比例加速，反应为混合级反应。;当100Ks[S]：反应速度不再增加，达最大反应速度，反应为零级反应。

V=Vmax[S]/[S]=Vmax，近似Vmax与[S]无关。;在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速度

的影响呈矩形双曲线关系（rectangularhyperbola);2、稳态法-Briggs-Haldane

修正式-米氏方程;[S]不断下降，[P]不断上升，[ES]一开始上升，然后在一定时间保持恒定。在这段时间内，ES的生成速度和ES的消失速度相等，达到动态平衡，称之为恒态。

速度方程的推导，保留了米孟氏方程前两点假设而将第（3）点“平衡”修改为恒态，即为恒态法。;;3、动力学参数的

意义与应用;;;;;;;;;Vmax和K0;;;;4、米氏常数的形变与应用;;（2）Hanes作图法;（3）Eadie-Hofstee法;(4)Scatchard作图法;（二）双或多底物动力学;2、双底物反应动力学分类;顺序机制;;;苹果酸脱氢酶催化苹果酸脱氢反应：;（２）随机顺序机制;;;;;在所有底物与酶结合之前，就有产物的释放，底物与酶的结合和产物的释放一来一去，好像打乒乓球一样，故称为乒乓机制（Ping-Pongmechanism);E和Ｆ是酶分子在反应过程中的两种不同稳定形式。

属于该机制的酶大多数具有辅基，如转氨酶、黄素酶等。;谷丙转氨酶催化的转氨反应：;３、双底物动力学机制;将１－２２式作倒数处理可得：;如将Ｂ固定几个浓度，在每一固定的Ｂ浓度时，测定不同Ａ浓度对速度的影响，反之，亦是，然后作双倒数图。;;;;当[B]或[A]无限大时，可以转变为单底物动力学方程式：;（２）顺序机制动力学

顺序机制推导的反应方程式：;其倒数方程式为：;如果在不同固定浓度的B时，测定1/V对1/[A]的关系以及在不同固定浓度的A时，测定1/V对1/[B]的关系，作图：;;;利用图1-19a斜率和纵轴截距分别对1/[B]：;;当[B]或[A]无限大时，可以转变为单底物动力学方程式：;二、酶浓度对酶反应速度的影响;高酶浓度的影响：;三、pH对酶反应速度的影响;pH影响酶活性的原因;pH类似一种特殊的抑制剂;四、温度对酶反应速度的影响;;五、激活剂对酶反应速度的影响;离子;;小分子有机化合物;激活酶;六酶的抑制;（一）抑制作用的分类;;;;;1专一性不可逆抑制剂;;（2）Kcat型不可逆抑制剂

（自杀性底物）;;有些不可逆抑制剂与酶分子中一类或几类基团反应，称为非专一性不可逆抑制剂。

一些重金属：Hg2+、Pb2+、Cu2+、Ag+等

与酶分子中的巯基、-NH2和吲哚基共价结合。

烷化剂：碘乙酸、碘乙酰胺、2，4-二硝基氟苯等。与酶分子上的巯基、羟基、咪唑基、甲硫基发生烷化反应

;

（三）可逆抑制剂

reversibeinhibtion;;1、竞争性抑制剂的动力学方程;

;;3.竞争性抑制作用举例;;2、非竞争性抑制剂的动力学方程;I可结合到E和ES上，S也可以结合到E和EI上，但产生的ESI无催化活性。;;;;;反竞争性抑制剂不和游离酶结合,却和ES中间复合体结合而成EIS,但EIS不能释放出产物,S和E的结合不但不排斥I反而促进I和E的结合.;;;;应用

单底物酶：如芳香基硫酸基的肼解

氰化物抑制芳香硫酸酯酶的作用

多底物：如双底物乒乓机制中，任何一个底物的竞争性抑制剂也是另一底物的反竞争性抑制剂。;4、混合性抑制的动力学方程;;;混合性抑制动力学图

A为非竞争性与反竞争性

B为非竞争性与竞争性;混合性抑制动力学特点:;;混合性抑制剂与其他可逆抑制剂的关系;;四种抑制剂动力学类型中，有一个共同的特点：

就是形成EI或EIS死端产物（deadendprodoct)：即指除逆转解离外（EI→E+I；EIS→ES+I）外，不可能转变为产物或其它中间产物。当[I]很大时全部转变为死端产物，抑制百分数可达100%。

;1、部分抑制

EIS有时并非死端产物，而可分解出E和I，并释放出P，即使[I]达极大值时，抑制百分数亦不能达到1