酶工程第6章酶分子的化学修饰.pptVIP

二、修饰反应的条件（一）pH与离子强度（二）温度与时间（三）酶与修饰剂的比例三、酶蛋白修饰反应的主要类型（一）酯化及相关反应（二）烷基化反应（三）氧化还原反应（四）芳香环取代反应（四硝基甲烷(Tetranitro-Methane,TNB)反应）

（五）溴化氰（BrCN）裂解反应

第三节酶蛋白肽链的大分子修饰（略）第四节修饰酶的性质一、修饰酶的热稳定性酶分子经化学修饰后，一般来说，其热稳定性有较大的提高。这是由于修饰剂的多个功能基团与酶分子上的多个基团（如氨基、羧基、咪唑基、酚基、巯基等）相互交联，增加了酶分子构象的稳定性，因而提高了酶对热的稳定性。但这种交联如果发生在酶分子活性中心，不但酶活力会下降，而且有时热稳定性亦有下降的现象。二、修饰酶的抗原性修饰酶的抗原性与修饰剂有关。比较公认的是PEG和人血清白蛋白在消除酶的抗原性上效果比较明显。PVP修饰酶，在重复作用于体内后，会诱导机体产生抗体而使酶失活。三、修饰酶对各类失活因子的抵抗力

修饰酶对蛋白酶、抑制剂均有一定的抵抗力，从而提高其稳定性。四、修饰酶在体内的半衰期修饰酶与天然酶比较，一般在体内的半衰期得到有效延长。由于酶分子经修饰后，增强对热、蛋白酶、抑制剂等的稳定性，从而延长了在体内的半衰期。五、最适pH大部分酶经化学修饰后，酶的最适pH发生了变化。这种变化在应用上有时具有重要意义。六、Km的变化大多数酶经修饰后，Vm没有明显变化。但有些酶经修饰后，Km值变大。这可能是由于屏蔽效应所引起的。*（五）溴化氰（BrCN）裂解反应

酶工程第六章酶分子的化学修饰酶分子的化修饰就是在分子水平上对酶进行改造，以达到改构和改性的目的。即：在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团（物质），特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接，从而改变酶的结构和性质。这被称为修饰试剂。化学修饰酶主要用于:基础酶学的研究疾病治疗医疗用酶要求:酶的稳定性高纯度高、易于进入细胞无免疫原性在基础酶学研究上：（1）探测酶活性必需氨基酸的性质和数目。（2）用于酶纯度的分析与检测（3）用于酶蛋白一级结构的测定（4）探测酶蛋白的结构变化与运动（5）测定酶蛋白部分区域的构象状态。（6）探索酶的作用机理和催化反应过程（7）探索酶分子的拓朴学及寡聚酶的亚基结合状态（8）酶蛋白结晶的X-射线衍射研究晶体结构（9）研究酶的固定化技术。在临床上应用，主要是如何克服酶在体内不稳定性、抗原性以及如何到达和集中于病灶细胞。第一节酶分子的修饰方法第二节酶化学修饰的基本要求第三节酶蛋白肽链的大分子修饰第四节修饰酶的性质第一节酶分子的修饰方法修饰方法表面修饰内部修饰一、酶的表面修饰（一）化学固定化(已讲)（二）酶的小分子修饰作用用小分子修饰剂共价修饰酶，可使酶稳定性提高。这主要是利用一些适宜的小分子修饰剂来修饰酶表面的一些基团：-COO-、-NH3+、-SH、-OH、咪唑基等。例如：将а-胰凝乳蛋白酶表面的氨基修饰成亲水性更强的NH2COOH并达到一定程度时，酶的热稳定性在60℃时，提高了1000倍，温度更高时稳定化效应更强烈。（三）酶的大分子修饰根据修饰分子的大小和对酶分子的作用方式:非共价修饰共价修饰1、大分子的非共价修饰（1）多聚物使用一些能与酶非共价地相互作用而又能有效地保护酶的一些添加剂，如聚乙二醇、右旋糖苷等，它们即能通过氢键固定在酶分子表面，也能通过氢键有效地与外部水相连，从而保护酶的活力。（2）多羟基还有一些添加物，如多元醇、多糖、多聚氨基酸、多胺等能通过调节酶的微环境来保护酶的活力。有些来自嗜热菌的酶具有较高稳定性，其原因正是由于保护性大分子（如肽和聚胺）发挥作用的结果。（3）蛋白质蛋白质分子之间相互作用时，其表面区域内排除了水分子，降低了介电常数，因而增加了相互作用力，其稳定性也就增加了。酶的多聚体或酶聚合体的活力和稳定性比单体高就是这个原因。最近，人们用抗体来稳定酶。