核酸的生物合成课件.pptVIP

(五）PCR(PolymeraseChainReaction)聚合酶鏈式反應（Mullis)PCR也稱體外酶促基因擴增，原理類似天然DNA複製。靶DNA分子變性後解鏈，兩條單鏈DNA分別與兩條引物互補結合，在4種dNTP存在和合適和條件下，由耐熱的TaqDNA聚合酶催化引物由5’－3’擴增延伸，形成兩條新的雙鏈DNA分子，並作為下一迴圈的範本。每經過一個變性、複性、延伸迴圈，範本DNA增加一倍。經過30～50個迴圈，可使原DNA量增加106～109倍。PCR的主要步驟：?範本DNA的變性：一般選用95℃左右1min，使DNA雙鏈解為單鏈；?複性：按引物實際情況確定適當溫度，時間一般30s至1.5min；?延伸：一般72℃1min；?迴圈數：按初始範本濃度確定，一般25－45之間。PCR技術原理示意圖

靶序列變性和引物複性迴圈1迴圈2迴圈3變性和引物複性鏈延伸Tag酶鏈延伸（六）、DNA損傷與修復遺傳物質的結構改變而引起的遺傳資訊改變，均可稱為突變（Mutation)。在複製過程中發生的DNA突變稱為DNA損傷(DNAdamage)。一些物理化學因數如紫外線、電離輻射和化學誘變劑均可引起DNA損傷，破壞其結構與功能。然而在一定條件下，生物機體能使這種損傷得到修復。從分子水準來看，突變就是DNA分子上堿基的改變。（1）突變的意義1、突變是進化、分化的分子基礎2、突變導致基因型改變3、突變導致死亡4、突變是某些疾病的發病基礎（2）引發突變的因素物理因素紫外線(ultraviolet,UV)、各種輻射UV化學因素（3）突變的分子改變類型錯配(mismatch)缺失(deletion)插入(insertion)重排(rearrangement)框移(frame-shift)DNA分子上的堿基錯配稱點突變(pointmutation)。發生在同型堿基之間，即嘌呤代替另一嘌呤，或嘧啶代替另一嘧啶。1）轉換發生在異型堿基之間，即嘌呤變嘧啶或嘧啶變嘌呤。2)顛換1、錯配鐮形紅細胞貧血病人Hb(HbS)β亞基N-val·his·leu·thr·pro·val·glu······C肽鏈CACGTG基因正常成人Hb(HbA)β亞基N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu······C肽鏈CTCGAG基因2、缺失、插入導致的框移缺失：一個堿基或一段核苷酸鏈從DNA大分子上消失。插入：原來沒有的一個堿基或一段核苷酸鏈插入到DNA大分子中間。框移突變是指三聯體密碼的閱讀方式改變，造成蛋白質氨基酸排列順序發生改變。缺失或插入都可導致框移突變。穀酪蛋絲5’……GCAGUACAUGUC……丙纈組纈正常5’……GAGUACAUGUC……缺失C缺失引起框移突變3、重排DNA分子內較大片段的交換，稱為重組或重排。由基因重排引起的兩種地中海貧血基因型（4）DNA損傷的修復修復(repairing)是對已發生分子改變的補償措施，使其回復為原有的天然狀態。光修復(lightrepairing)切除修復(excisionrepairing)重組修復(recombinationrepairing)SOS修復(SOSrepairing)修復的主要類型1、光復活（photoreactivation）可見光（最有效波長400nm）啟動生物界廣泛分佈（高等哺乳動物除外）的光復活酶，該酶分解嘧啶二聚體。是一種高度專一的修復形式，只分解由於UV照射而形成的嘧啶二聚體。2、切除修復（excisionrepair）即在一系列酶的作用下，將DNA分子中受損傷的部分切除掉，並以完整的那一段為範本，合成出切去的部分，從而使DNA恢復正常。這是一種比較普遍的修復機制。細胞的修復功能對於保護遺傳物質DNA不受破壞有重要意