DNA的生物合成课件.pptxVIP

DNA的生物合成;現代生物學已充分證明，核酸是生物遺傳的物質基礎。

除少數RNA病毒外，幾乎所有的生物均以DNA為遺傳資訊的載體。;;;;;;Crick–中心法則

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RNA複製;主要內容;1.DNA複製準備replication;1958年，Meselson和Stahl利用N的同位素15N標記大腸桿菌DNA，首先證明了DNA的半保留複製。;1.1DNA複製主要特點;問：DNA按半保留方式複製。如果一個完全放射標記的雙鏈DNA分子，放在不含有放射標記物的溶液中，進行兩輪複製，所產生的四個DNA分子的放射活性將會怎樣：

A．半數分子沒有放射性

B．所有分子均有放射性

C．半數分子的兩條鏈均有放射性

D．一個分子的兩條鏈均有放射性

E．四個分子均無放射性

;1.2DNA複製的條件;高能的底物：dATP、dGTP、dCTP

dTTP。

酶：DNA聚合酶、解旋酶、拓撲異構酶、

單鏈DNA結合蛋白、引物酶、DNA連接酶等。

;1.3原核生物的酶類;DNA解螺旋酶，也叫解鏈酶，就是催化DNA雙螺旋解鏈

大腸桿菌中有解螺旋酶活性的蛋白質已發現有十多種，它們都有依賴雙鏈DNA的ATPase活性，依靠水解ATP提供解鏈所需要的能量。

;DNA雙螺旋經解螺旋酶解鏈形成的單鏈很快被單鏈結合蛋白所覆蓋，使解鏈DNA保持單鏈狀態。;在大腸桿菌中發現了三種DNA聚合酶，分別命名為DNA聚合酶I、II、III。

1999發現DNA聚合酶?IV、V

;原核生物;DNA的合成有沒有方向性？

DNA聚合酶為多功能酶，又聚合作用，

又外切作用，互相矛盾，怎樣解釋？;DNA聚合酶I它的主要功能是參與DNA修復，切除RNA引物。

DNA聚合酶Ⅱ它的主要功能可能是參與DNA的損傷修復。（具體不祥）

DNA聚合酶Ⅲ寡聚酶，DNA聚合酶Ⅲ才是催化大腸桿菌DNA複製主要的酶。;

大腸桿菌的DNA複製需要由引物酶合成一小段RNA作為DNA合成的引物，因為所有的DNA聚合酶都只有按範本鏈的指令，在引物3‘-OH端延伸新鏈的功能，沒有從頭開始合成的活力。

;DNA的合成具有方向性，那麼兩條新

合成鏈上需要的引物數目是否相同？

;引起拓撲異構反應的酶稱為拓撲異構酶。DNA複製時範本DNA超螺旋的鬆弛和複製後超螺旋的??恢復都需要拓撲異構酶的參與。

按照作用機制，拓撲異構酶可分為Ⅰ、Ⅱ兩種類型。;拓撲異構酶Ⅱ也叫旋轉酶(gyrase)。

拓撲異構酶Ⅱ在有ATP功能的情況下，可引入負超螺旋，可消除複製叉前進時產生的扭曲張力，它和拓撲異構酶Ⅰ一起共同控制著DNA的拓撲結構。;DNA連接酶催化單鏈DNA切口共價連接。

注意：

切口上的3-OH與5-磷酸基必須相鄰

大腸桿菌DNA連接酶利用依賴NAD+，真核細胞則需要ATP為反應供能。;問

大腸桿菌DNA連接酶需要下列哪一種輔助因數？

A．FAD作為電子受體

B．NADP+作為磷酸供體

C．NAD+形成活性腺苷醯酶

D．NAD+作為電子受體

E．以上都不是

;2.DNA複製的過程;2.1複製的起始;

原核細胞染色體的複製只能從一個特定位點開始，在另一個特定位點上終止。像這樣能獨立進行複製的單位稱為複製子（replicon）。

此外，質粒DNA和細胞器DNA都只有一個複製起點；

;真核細胞基因的線狀DNA上含有多個複製起點，是多複製子的。;一些特殊的蛋白質可以識別並結合於複製起點，隨即使DNA雙螺旋局部解鏈，形成“複製眼”，在其兩端DNA的兩股鏈呈Y字狀，稱為複製叉，分別向兩側進行複製。;2.2鏈的延伸;DNA複製時，5′—TpApGpAp－3′序列產生的互補結構是下列哪一種：

A．5′—TpCpTpAp－3′

B．5′—ApTpCpTp－3′

C．5′—UpCpUpAp－3′

D．5′—GpCpGpAp－3′

E．3′—TpCpTpAp－5′

;當複製叉沿DNA範本向前移動時，新生成的DNA方向與複製叉移動方向相同嗎？

為什麼？;選擇若以走向為3→5的親代鏈為範本，子代鏈就能連續合成，稱為前導鏈（leadingstrand）

;若以走向為5→3的親代鏈為範本,子代鏈就先合成許多小片段，再由DNA聚合酶Ⅰ切除片段上的引物，填補片段之間的空缺，最後由連接酶把它們連接成一條完整的子代鏈，稱為滯後鏈（laggingstrand）;岡崎片段：滯後鏈的合成是以親代5′3為範本鏈，先合成一些小的片段，然後再將