上海海洋大学《微生物》课件-实验二_细菌的革兰氏染色法.pptVIP

实验二细菌的革兰氏染色实验内容实验目的实验原理实验材料实验方法和步骤实验结果记录思考题一、实验目的：1.了解革兰氏染色原理及掌握操作；2.巩固无菌操作技术及显微镜操作技术细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。二、实验原理：细菌对于革兰氏染色的不同反应，主要是由于它们细胞壁的成分和结构不同。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，经乙醇处理后由于脱水作用使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞中不易脱色，因此细菌仍保留初染时的紫色。G-菌的细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低，而且含有较多脂类物质，故用乙醇脱色时脂类物质被溶解，细胞壁的通透性增加，使初染的结晶紫-碘的复合物渗出细胞，结果是细菌被脱色，再经沙黄复染后就成了红色。革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌细胞壁的构造

革兰氏阳性细菌革兰氏阴性细菌细胞膜脂磷壁酸肽聚糖周质空间细胞膜外膜脂多糖孔蛋白磷脂膜蛋白三、实验材料1、菌种：金黄色葡萄球菌（Sa）大肠杆菌（Ec）2、染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄、香柏油、二甲苯3、器材：显微镜、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、玻片搁架、玻璃缸四、实验步骤：1.制片：分别涂片、晾干和固定。2.初染：将玻片置于废液缸玻片搁架上，滴加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1～2min，水洗（倾去染色液，用水小心地冲洗）。3.媒染：滴加碘液，媒染1min，水洗。4.脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色20～30s至流出液无色，立即水洗5.复染：滴加沙黄复染液,复染2～3min，水洗、晾干。6.镜检：低倍—高倍—油镜7、实验完毕后的处理：①将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个方向擦拭。②看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。③将显微镜复位、归还。五、实验结果记录菌名菌体颜色高倍镜下菌体形态油镜下菌体形态G+或G-六、思考题1.革兰氏染色成败的关键步骤是什么？2.造成革兰氏染色结果不正确（假阴性或假阳性）的主要原因有哪些？七、注意事项1、使用染料时注意避免沾到衣物上，同时使用乙醇脱色时勿靠近火焰。2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。