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生物材料抗钙化试验植入方案
1．动物植入试验
1.1植入前准备工作
1.1.1实验动物准备
1）Wistar雄性幼鼠，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。
植入时年龄应约为3周龄、体重50g左右（注：供应商出库时体重为35-40g，从北京经陆路运至西安，运输时间约1.5天，静养1天），2）验收要求：核对数量，体重在34－48g；
①称重后，记录每只老鼠体重，分档分笼存放：46-48g、41-45g、36-40g；
②在笼外标识，25度环境，常规饲料饲养；
1.1.2器具、试剂准备
1）生理盐水准备：500mL/瓶、一次备90瓶；
2）麻醉剂准备：2%戊巴比妥钠溶液，30mL,提前一天准备；例：配制100mL2%戊巴比妥钠溶液，称取2g戊巴比妥钠，加入100mL生理盐水，完全溶解后，过滤除菌；
3）手术用器械准备：每批试验，需换药碗约30个、眼科剪4把、敷料镊5把、眼科弯镊4把、持针钳4把、手术缝合针线若干，可同时供4人进行动物植入试验；
4）植入前准备：剃毛机1个、1mL无菌注射器（每次试验1只针管＋1只针头）、碘酒、75%酒精、无菌手套、标签纸（用于漂洗容器标识，两种颜色）、记号笔；
5）植入物取出时准备：去离子水、换药碗2个、无菌手套、补片小包装（分别按样品组标示：试验组蓝色标签，对照组红色标签）、干燥器2个（含吸水硅胶）、称量瓶400个、干燥箱、电子天平（万分位精度）、薄膜手套、记号笔。
1.1.3试验样品准备
1）试验品：牛心包片（1cm2）、猪心瓣叶（1cm2）；
2）对照品：牛心包片（未经抗钙化处理，1cm2）、猪心瓣叶（未经抗钙化处理，1cm2）；
3）植入前样品处理：每组（〈10片）均需用无菌生理盐水500ml，分三次充分漂洗，每次至少5分钟；完成后将材料至于（新）生理盐水中备用。（注意：不得将包装中的戊二醛溶液混入生理盐水中）；
4）所有样品经包装灭菌后在恒温箱中保存运送，运输温度为5-10℃。
1.2动物植入流程
1.2.1大鼠筛选
1）试验前称量大鼠的体重，选择50g±2g的大鼠进行植入试验。
2）将大鼠转移至手术区（开启紫外灯照射半小时以上）；
注：人员进入手术区，需戴口罩、帽子、无菌手套；
1.2.2动物麻醉
麻醉剂采用2%戊巴比妥钠生理盐水溶液，按照0.12mL/50g的比例，腹腔注射。
1.2.3植入前准备
麻醉后，剃除背部植入区（以脊柱为中线）的毛发，碘酒消毒术区，75%酒精除碘两次，防止毛发与植入物或创面接触。
1.2.4样品植入
用眼科剪在预定植入区沿脊柱中线剪开背部皮肤，皮肤切口应尽量小，以能通过植入物为准。通过皮肤切口，用敷料镊在脊柱两侧皮下各扩张1个空腔，不应有明显出血（否则应废弃该动物），皮囊面积大于1cm2；以脊柱为中线，将样品平整放入空腔（左边植入试验片，右边植入对照片），样品之间不得接触（相互间距至少10mm以上）。
1.2.5缝合：采用无菌的不可吸收缝线缝合切口（提起小鼠背部皮肤，切口右侧边缘一端进针，穿过小鼠皮下肌肉组织，穿过切口左侧中间位置，回到切口右侧另一端边缘，正反四个结固定切口），碘酒消毒，将完成植入的幼鼠放入对应鼠笼中，在背部植入区盖好纱布。
注：手术期间注意无菌操作和防感染措施。
1.2.6待麻醉剂药效过后，核对幼鼠存活情况并记录。
1.2.7观察：观察周期8周，五只大鼠一笼，每天观察存活情况，采用常规饲料喂养，不用药。
1.2.8植入物取出
1）植入物取出前一天，取植入时冗余植入的3只大鼠预试验。以明确下述步骤的实际可操作性；
2）将待取出植入物的大鼠转移至手术区；
3）依次将每个试验组的大鼠脱颈椎处死，置于原鼠笼上备用。
4）依次将每组大鼠在水中浸湿，剪开大鼠背部皮肤，撕开大鼠背部皮肤直至出现植入的样品；
①取眼科弯镊两把，仔细分离试验样表面的粘附组织；取出试验样置纯水中，检查并确认已将粘附组织完全除净，放入已经标识的试验组补片包装瓶中；
②取眼科弯镊两把，仔细分离对照样表面的粘附组织；取下对照样置纯水中，检查并确认已将粘附组织完全除净，放入对应的已经标识的对照组补片包装瓶中；
5）待每组试验片和对照片全部取出、剥离、保存后，再进行下一组操作；
6）取出的样品在保鲜盒中冷藏（放置冰袋或冰块），待植入物全部取出后，转移至干烤恒重的实验室，将补片包装瓶中的样品分至恒重完成的称量瓶中；
7）称量瓶的标识；
8）将称量瓶转移至干燥箱中（半盖），首次干烤：75℃，12小时（以后每次：75℃，2小时），阖上称量瓶瓶盖，转移至干燥器中，冷却，30分钟后称重；
注：样品取出后，需冷藏，6小时内进入干烤。
9）重复8）的步骤，直至称量
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