生物材料抗钙化动物试验分组方案15-09-29第一、二包.xlsVIP

合格标准

试验组设定（醇类）

试验组设定（EC）

第三包分组

第三包牛心包片醇类改性抗钙化动物试验分组

更新日期：2015-09-29

序号

鼠笼编号

试验组

植入部位

工艺顺序（含试剂）

交联

改性

脱细胞处理

0.5%GA

100%2,3-丁二醇

80%乙醇

2%EC

0.125%胰蛋白酶

1%Triton-X-100

48h

3d

7d

20天

72h

8h

24h

无

试1

GA+丁二醇

√

对1

胰酶+T-X-100+GA+丁二醇

笼1

试2

左侧

对2-1

右侧

笼2

对2-2

GA+丁二醇+胰酶+T-X-100

对2-3

GA+胰酶+T-X-100+丁二醇

笼3

对2-进

试3

GA+丁二醇+EC

笼4

对3-1

GA+胰酶+T-X-100+丁二醇+EC

对3-进

笼5

试4

GA+EC+丁二醇

对4-1

GA+EC+丁二醇+胰酶+T-X-100

笼6

试5

左、右侧

GA+乙醇

笼7

试6

GA+乙醇+EC

对6-进

笼8

试7

GA+EC+乙醇

对7-1

GA+胰酶+T-X-100+EC+乙醇

笼9

试8

对8-进

GA(进口本底植入)

本表格的技术细节：

1、红色底（试1和对1）暂不送样；绿色底（试2、试3）作为送中检所检测的试验组；青绿色底（对2-进、对3-进、对6-进、对8-进）的试验组使用进口牛心包补片；茶色底（试5）在动物植入时，同一只动物植入两片；

2、本表格所有环节的漂洗，均为D-hanks液(无钙\镁)；包括如：采集\返厂途中的保存\初剥\初剥后漂洗\精剥\改性前漂洗\改性后漂洗。牛心包片从采集到进入交联之前的漂洗工艺为D-hanks液漂洗4-6h；

3、本表格中改性前、后的漂洗，都须充分和彻底，去除残留的GA和EC对下一工序的影响；漂洗工艺：手漂洗3次，15分/次，摇床漂洗3小时，换液/每半小时。

4、本表格中的温度要求：①采集(含返厂路途的保存)、初剥、初剥后的漂洗温度，均为4℃（陆续放置hankS冰块）。②改性前、后漂洗\各环节处理后的保存（包括成品保存）温度均为5-10℃；③交联\改性\灭菌温度为20-25℃;

5、本表格中交联/灭菌/保存过程的溶液分别是0.5%GA/0.5%GA/0.3%GA的PBS溶液；

6、本表格所有环节处理后，若保存，均为5-10度下的0.3%GA。但灭菌均在20-25度下的0.5%GA7天（已经认证有效)，灭菌后须重新须更换液体保存。

7、本表格的交联、改性工序使用玻璃容器，包装采用医用级PP材质的包装瓶。

8、本表格每个环节更换液体前，均需对配好的液体(EC溶液无法用PH计检测,用PH试纸)，进行PH测定(部分交联和改性过程中也进行了测定)，要求PH7.35-7.45。

9、本表格共设定17个试验组，笼1-笼5、笼7-笼9对应的试验组，每组10只动物，每只动物的左侧和右侧分布植入对应试验组的材料。笼6对应的试验组，每组5只动物，每只动物植入2片本组材料；

10、本表格的每个试验组，需同步准备热皱缩温度检测的样品（80*20mm规格，4条；青绿色底（进口牛心包片）的数量为2条；）和北京中检所检测的样品（绿色底的试验组，4P6规格，20片；另准备未经改性处理的对照样，4P6规格，20片；）；

猪心瓣叶EC改性的抗钙化动物试验分组

群1

组

漂洗工艺及各道工序温度

(D-hanks液4℃漂洗4-6h)交联\交联后保存\改性前、后漂洗\改性\成品保存温度均为5-10℃，灭菌温度为室温（20-25℃）

交联（0.5%GA的PBS液，48-50h），灭菌（0.3%GA的PBS液），保存（0.3%GA的PBS液）

1片试验片+1片对照片/1只动物

原始改性方法

现用改性方法

易主任新增改性方法

孟增的改性方法

5%EC，72h

5%EC，48h

2%EC，72h

2%EC，48h

猪心瓣叶片

/

样本组1

10只

群2

漂洗工艺及各道工序温度

(D-hanks液4℃漂洗4-6h）

交联后保存\改性前、后漂洗\成品保存温度5-10℃；交联\改性\灭菌温度为20-25℃；

交联（0.3%GA的hepes液，48-50h）灭菌（0.3%GA的hepes液）保存（0.3%GA的hepes液）

样本组2

样本组9

样本组3

样本组10

本表格总计

50只

本表格的技术细节

1、本表格为猪心瓣，群1（黄色底）交联液为0.5%GA的PBS液，群2（蓝色底）交联液为0.3%GA的hepes液。

2、每群的交联液（GA）若是用PBS配制（或hepes液配制），则灭菌和保存的GA液也均用PBS配制（或均用hepes液配制）。

3、