遗传性痉挛性共济失调症相关病理蛋白NKX6-2的结构与功能研究.pdfVIP

摘要

遗传性痉挛性共济失调（Hereditaryspasticataxia，HSA）是进行性肢体痉

挛和小脑性共济失调形成的一组神经退行性疾病，严重发病时会导致早期儿童死

亡。到目前为止，已发现两种常染色体显性和七种常染色体隐性形式的HSA，

并且基本上都确定了相应的致病基因，其中NKX6-2是SPAX8型常染色体隐性

痉挛性共济失调的致病基因。NKX6-2是一种NKX同源盒蛋白家族的转录因子，

其双等位基因突变会影响少突胶质细胞成熟，引起髓鞘发育不良，进而导致痉挛

性共济失调。

目前NKX6-2具体的致病机制，如核酸结合模式等问题尚不清楚。对此，

本文将NKX6-2作为研究对象，创建了NKX6-2野生型和5种病理突变体

p.L163Vp.L181Vp.N198Dp.R200Wp.R200Q

（、、、和）蛋白的表达纯化体系，

进行NKX6-2蛋白与DNA复合物的结晶筛选及优化，并通过X射线衍射法得

到了NKX6-2蛋白与DNA复合物的高分辨率三维结构，从分子层面阐述了

NKX6-2蛋白识别DNA的精准模式。同时本论文还进行了NKX6-2野生型和病

理突变体蛋白与DNA的体外结合实验，用来表征二者之间的相互作用。上述工

作为理解NKX6-2的致病分子机制以及病变影响模式提供了结构依据，推进了

对遗传性痉挛性共济失调及其并发症的病理研究，对该疾病的治疗具有重要的指

导价值。

关键词：遗传性痉挛性共济失调，同源盒蛋白，NKX6-2，病理突变体，三维

结构，体外结合

I

ABSTRACT

Hereditaryspasticataxia(HSA)isasetofneurodegenerativediseasesformedby

progressivelimbspasmandcerebellarataxia,whichcanleadtoearlychildhooddeath

inseverecases.Sofar,twoautosomaldominantandsevenautosomalrecessiveforms

ofHSAhavebeenfound,andthecorrespondingpathogenicgeneshavebeenbasically

identified,amongwhichNKX6-2isthepathogenicgeneofSPAX8autosomal

recessivespasticataxia.NKX6-2isatranscriptionfactoroftheNKXhomeobox

proteinfamily.Thedouble-allelicmutationofNKX6-2affectsoligodendrocyte

maturationandcausesmyelindysplasia,whichleadstospasticataxia.

Atpresent,thespecificpathogenicmechanismofNKX6-2,suchasnucleicacid

bindingpattern,remainsunclear.Inthisstudy,NKX6-2wild-typeandfive

pathologicalmutants(p.L163V,p.L181V,p.N198D,p.R200Wandp.R200Q)protein

expressionandpurificationsystemwereestablished,andcrystallizationscreeningand

optimizationofNKX6-2proteinandDNAcomplexwerecarriedout.Thehigh-

resolutionthree-dimensionalstructureofNKX6-2proteinandDNAcomplexwas

obtainedbyX-ray