以酿酒废弃物为底物的高效产电菌群设计与构建.pdfVIP

摘要

微生物燃料电池（Microbialfuelcell,MFCs）利用电活性微生物降解有机物，

为废弃生物质中的化学能转化为电能开辟了新途径。目前在沼气生产、土壤修复、

发酵食品制造和废水处理等相关工业过程建立了广泛的应用。丢糟和黄水是酿酒

过程中产生的主要废弃物，主要成分为乳酸、纤维素和半纤维素。而采用MFC

处理酿酒废弃物由于成本较低、没有污染，正在成为人们关注的重点。但是，由

于传统电活性微生物只能利用酿酒废弃物中的有机酸，废弃物中富含的纤维素和

半纤维素成分不能转化利用，导致污染物处理效率不高。此外，科学家们采用基

因工程手段扩大了产电菌的底物利用范围，但是复杂的基因线路增大了微生物的

代谢压力、排异反应，限制其自身的碳代谢通量。产电菌群能够通过微生物间的

能量及物质级联反应，在扩充碳通量的同时为产电菌提供电活性小分子，增强了

产电菌群的整体电子输出能力。然而天然产电菌群由于微生物种群未知，使其难

以按照人为指导发挥其性能，最终使得底物转化效率低下。

本研究针对天然产电菌群种类繁多，分支代谢复杂，能量转化特异性差的关

键科学问题，依据劳力分工、菌群适配的设计原则，将多种微生物间能量和碳代

谢进行互补，构建了以酿酒废弃物为底物的人工高效产电菌群。并依据产电菌群

胞外电子传递机制，通过合成生物学手段，分别从强化电活性生物膜合成和增加

胞外电子传递载体分泌这两方面，进一步提升了产电菌群将酿酒废弃物的化学能

转化为电能的效率。主要研究结果如下：

（1）构建酿酒废弃物发酵菌群系统，提高酿酒废弃物的降解效率：为分解

酿酒废弃物中产电菌不能利用的纤维素和半纤维素等主要成分，我们利用高产纤

维素酶的模式菌株里氏木霉进行丢糟诱导产酶实验，并验证了在偏酸性pH范围

4.0-7.0内里氏木霉产纤维素和半纤维素酶的能力，随后优化酶系水解条件，获得

最高糖化率为60.30%。同时，为进一步降解纤维素，利用分步乳酸发酵的方法

引入戊糖乳杆菌，成功将纤维素糖化产生的多种还原糖统一转化为乳酸，最终8

天后得到乳酸含量为10.53mM。

（2）构建酿酒废弃物产电菌群系统，提高废弃物处理效率：为了处理酿酒

废弃物及发酵菌群产生的有机酸，达到生物资源转化为电能的目的，依次引入模

式产电微生物希瓦氏菌和硫还原地杆菌，构建酿酒废弃物产电菌群。首先引入希

瓦氏菌用来处理乳酸，与酿酒废弃物发酵菌群混合构建三元产电菌群，最高功率

2

密度为40.19mW/m。之后，在三菌体系中引入硫还原地杆菌构建四元产电菌群，

硫还原地杆菌用来消耗菌群构建过程中产生的乙酸，减轻过量乙酸对产电菌群的

抑制作用，进一步提高酿酒废弃物的处理效率，最终四菌体系的COD去除率提

2

升到52.30%，最高功率密度达到96.80mW/m。

（3）合成生物学进一步强化产电菌群电化学性能，提高界面电子传递效率：

为了提升菌群的电子传递能力，通过合成生物学手段筛选电活性生物膜定植过程

发挥关键作用的胞外多糖蛋白，在希瓦氏菌中过表达胞外多糖基因wbfY，加强

了菌群电活性生物膜的形成能力，强化了菌群的直接电子传递过程并且增加了产

电菌对电极表面的定植空间。同时，通过外源表达黄素合成基因簇，提升了希瓦

氏菌黄素合成能力，强化了菌群的间接电子传递过程，使混菌胞外电子传递效率

2

大幅提高，功率密度提高到243.72mW/m。

关键词：产电菌群设计与构建，里氏木霉，戊糖乳杆菌，希瓦氏菌，硫还原

地杆菌，酿酒废弃物生物处理

ABSTRACT

Microbialfuelcells(MFCs)useelectroactivemicroorganismstodegradeorganic

matter,openingupnewwaysofconvertingchemicalenergyfromwastebiomassinto

electricity.Awiderangeofapplicationshavebeenestablishedinindustrialprocesses

relatedt