第二十二章 维生素.pptVIP

两阶段发酵法：第一阶段：在不通气条件下进行，以促使细菌的生长和钴啉醇酰胺的合成，生长的最适温度是37℃；第二阶段：通气培养使5，6-二甲苯并咪唑得以迅速合成并将钴啉醇胺转化为腺苷钴胺，合成维生素B12最适温度是30℃。可在前期37℃培养2天让细菌生长繁殖，然后再30℃发酵。培养基含糖量应维持在l%左右，所以需中间补糖。发酵过程由于不断产生丙酸和少量乙酸及CO2，培养基pH不断下降，影响目的产物的生物合成，所以要不断加氨维持pH。也可用Na2CO3或CaCO3中和。第122页，共199页，星期日，2025年，2月5日谢氏丙酸杆菌中试规模发酵生产维生素B12的工艺图第123页，共199页，星期日，2025年，2月5日斜面种子培养：取脱脂牛奶冷冻管保藏的谢氏丙酸杆菌，接种于斜面培养基上，30℃培养4天．斜面培养基组成为：每1L含胰蛋白胨10g、酵母提取物10g、过滤西红柿汁200ml、琼脂15g，pH7.27一级种子培养：取2L摇瓶，装一级种子培养基0.4L，接种斜面培养基培养的菌苔.30℃静止培养2天。一级种子培养基组成为：每1lL含胰蛋白胨10g、酵母提取物10g、过滤西红柿汁200ml，pH7.2第124页，共199页，星期日，2025年，2月5日二级种子培养：30L不锈钢发酵罐中装二级种子培养基10L，接种一级种子0.3L，30℃不通气培养24小时（用NH4OH维持在pH6.5）。二级种子培养基组成为：每1L含玉米浆20g、葡萄糖90g，调pH6.5发酵培养：500L发酵罐中装发酵培养基349L，120℃灭菌40分钟，接种二级种子7L，在不通气、微氮气压力和慢搅拌下30℃培养80小时，再在搅拌和2m3/h通气下培养88小时。整个发酵过程用NH4OH维持在pH6.5。发酵培养的组成为：每1L含玉米浆40g、葡萄糖100g(分开灭菌).CoCl220mg，调节pH6.5。第125页，共199页，星期日，2025年，2月5日发酵过程中，用中空纤维微过滤器过滤发酵液，除去丙酸杆菌在生物合成维生素B12时产生的抑制生物生长的丙酸，达到高密度细胞培养，可使维生素B12的产量提高近90%。第126页，共199页，星期日，2025年，2月5日生产抗生素、酒精、丙酮、丁醇、造纸、乳制品、枸橼酸处理后的废液等都是生产维生素B12的原料。生产上一般是利用抗生素工业废液，绝大多数是从链霉菌废液中提取。自工业废液中提取第127页，共199页，星期日，2025年，2月5日从庆大霉素发酵液中提取B12的工艺路线第128页，共199页，星期日，2025年，2月5日丙酸菌发酵产生的各种钴胺素差不多都存在于细胞内，由于该菌无毒，经过滤或高速离心分离得到菌体后，可直接用作家畜和家禽的饲料添加剂。如用于临床，须进一步分离提取和精制。第129页，共199页，星期日，2025年，2月5日工艺路线薛氏丙酸杆菌细胞中提取维生素B12第130页，共199页，星期日，2025年，2月5日工艺过程过滤水解：菌体与维生素B12结合比较牢固并包埋于菌体内部，过滤除去菌体，然后加酸加热水解破坏菌体释放出维生素B12。提取：苯酚对维生素B12的溶解能力比水大，苯酚与丁醇混溶形成的混合物与水不互溶，经充分搅拌后维生素B12从水相转入苯酚-丁醇相。第131页，共199页，星期日，2025年，2月5日一次水提：当向酚-丁醇混合液中加入氯仿后，三者混合，降低苯酚对B12的溶解力而进入水相，氯仿加的越多，维生素B12转入水里越容易。氰化：氰化钠能吸附和取代类似维生素B12分子中的Fe3+和其他基团，使之全部转化为氰钴胺素（B12）第132页，共199页，星期日，2025年，2月5日酚-氯仿提取：与苯酚-丁醇溶剂提取相似，只不过用氯仿代替丁醇后提高了有机溶媒对维生素B12的选择性溶解。二次水提：丁醇、氯仿加入酚-氯仿溶液中，适当提高了溶剂对蛋白质等杂质的溶解程度。酸化：调pH至3.5-4.0．沉淀，除去部分酸性不溶物。第133页，共199页，星期日，2025年，2月5日层析：利用亲和层析而达到分级分离从而得到高纯度的维生素B12。结晶：维生素B12不溶于纯丙酮．但溶于含水丙酮，向原液中